କ୍ଲଷ୍ଟର୍ଡ ନିୟମିତ ଭାବରେ ଇଣ୍ଟରସ୍ପେସଡ୍ ସର୍ଟ ପାଲିଣ୍ଡ୍ରୋମିକ୍ ରିପିଟ୍ସ (CRISPR) ହେଉଛି ଏକ ତୃତୀୟ ପିଢ଼ିର ଜିନୋମ୍ ଏଡିଟିଂ କୌଶଳ ଯାହା ଏହାର ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୁପୁଟ୍ ଫଳାଫଳ ସହିତ ବିଶ୍ୱରେ ବିପ୍ଳବ ଆଣିଛି। ଏହାକୁ ବିଭିନ୍ନ ଜୈବିକ ରୋଗ ଏବଂ ସଂକ୍ରମଣର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି। ବିଭିନ୍ନ ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପ୍ରୋକାରିଓଟ୍ସ (ଯେପରିକି ଆର୍କିଆ) ମାନଙ୍କର ମଧ୍ୟ ଫେଜ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ସିଷ୍ଟମ ଅଛି। ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି ଯେ CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ ରଣନୀତି ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ପ୍ରତିରୋଧ ଜିନ୍, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରି ଟ୍ରିପଲ୍ ନେଗେଟିଭ୍ ସ୍ତନ କର୍କଟ (TNBC) ର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ଅଗ୍ରଗତିକୁ ବାଧା ଦେଇପାରେ। ଏହି ଚିକିତ୍ସାଗତ ହସ୍ତକ୍ଷେପଗୁଡ଼ିକ TNBC ରେ ମଧ୍ୟ ପରିଲକ୍ଷିତ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ଭଳି ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜିଂ ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରେ। ବର୍ତ୍ତମାନ, କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବାକୁ CRISPR/Cas9 ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଯେପରିକି ଭୌତିକ (ମାଇକ୍ରୋଇଞ୍ଜେକ୍ସନ, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋପୋରେସନ୍ ଏବଂ ହାଇଡ୍ରୋଡାଇନାମିକ୍ ମୋଡ୍), ଭାଇରାଲ୍ (ଆଡେନୋ-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଭାଇରସ୍ ଏବଂ ଲେଣ୍ଟିଭାଇରସ୍) ଏବଂ ଅଣ-ଭାଇରସ୍ (ଲାଇପୋସୋମ୍ ଏବଂ ଲିପିଡ୍ ନାନୋପାର୍ଟିକଲ୍ସ) - କଣିକା। ଯଦିଓ TNBC ର ଆଣବିକ କାରଣ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ମଡେଲ ବିକଶିତ ହୋଇଛି, ଜିନୋମ୍ ଏଡିଟିଂ ଉପକରଣ ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟଭିତ୍ତିକ ପଦ୍ଧତିର ଅଭାବ ସେମାନଙ୍କର କ୍ଲିନିକାଲ୍ ପ୍ରୟୋଗକୁ ସୀମିତ କରେ। ସଂକ୍ଷେପରେ, ଏହି ସମୀକ୍ଷା ବିଦ୍ୟମାନ ପ୍ରମାଣ ଉପରେ ଆଧାର କରି TNBC ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ଚିକିତ୍ସାର ପ୍ରଗତି, ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ, ସୀମାବଦ୍ଧତା ଏବଂ ସମ୍ଭାବନାକୁ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ପରୀକ୍ଷା କରେ। ଆମେ ଏହା ମଧ୍ୟ ଆଲୋକିତ କରୁଛୁ ଯେ TNBC ର ଚିକିତ୍ସାରେ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତ୍ତା ଏବଂ ମେସିନ୍ ଶିକ୍ଷଣର ମିଶ୍ରଣ କିପରି CRISPR/Cas9 ରଣନୀତିକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବ।
କର୍କଟ ରୋଗ ଅନିୟନ୍ତ୍ରିତ କୋଷ ବିଭାଜନ, କୋଷ ଚକ୍ର ଯାଞ୍ଚ ପଏଣ୍ଟରେ ବାଧା ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ଦମନକାରୀ ଜିନ୍ (TSGs) ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନିତ (ମାଥ୍ୟୁସ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2022)। ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର କର୍କଟ ମଧ୍ୟରୁ, ସ୍ତନ କର୍କଟ ହେଉଛି ମହିଳାଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ସବୁଠାରୁ ସାଧାରଣ ପ୍ରକାରର କର୍କଟ ଏବଂ ବିଶ୍ୱବ୍ୟାପୀ ଏହାର ମୃତ୍ୟୁ ହାର ଅଧିକ (ୱାକ୍ସ ଏବଂ ୱିନର, 2019)। ସ୍ତନ କର୍କଟ ହେଉଛି ଏକ ବିବିଧ ରୋଗ ଯାହାର ବିବିଧ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଅଛି, ଯେପରିକି ହିଷ୍ଟୋଲୋଜିକାଲ୍ ଏବଂ ଜୈବିକ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ, କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଉପସ୍ଥାପନା ଏବଂ ଆଚରଣ, ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (ୱେଇଗେଲ୍ଟ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2010)। ସ୍ତନ କର୍କଟ ବର୍ଗୀକରଣ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ପୂର୍ବାନୁମାନ ପାଇଁ ସଠିକ୍ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରେ। ସାଧାରଣ ବାୟୋମାର୍କର ଏବଂ କ୍ଲିନିକୋପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକର ବ୍ୟବହାର ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ବର୍ଗୀକରଣ ପାଇଁ ମୁଖ୍ୟ ମାନଦଣ୍ଡ ହୋଇଛି (Tsang and Tse, 2019)। ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ପୂର୍ବାନୁମାନ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅନେକ କାରଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୁଏ, ଯେଉଁଥିରେ ଏଷ୍ଟ୍ରୋଜେନ୍ ରିସେପ୍ଟର (ER), ପ୍ରୋଜେଷ୍ଟେରନ୍ ରିସେପ୍ଟର (PR), ମାନବ ଏପିଡର୍ମାଲ ବୃଦ୍ଧି କାରକ ରିସେପ୍ଟର 2 (HER2/neu), ଏବଂ ହିଷ୍ଟୋଲୋଜିକାଲ୍ ଗ୍ରେଡ୍, ଟ୍ୟୁମର ପ୍ରକାର ଏବଂ ଗ୍ରେଡ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଆକାର ଏବଂ ଲିମ୍ଫ ନୋଡ୍ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ (Al-Tubaiti, 2020)। ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ପାଞ୍ଚଟି ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଆଣବିକ ଉପପ୍ରକାର ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି, ଯେଉଁଥିରେ luminal A, luminal B, HER2-ସମୃଦ୍ଧ, ବେସାଲ୍-ପରି, ଏବଂ claudin-low (Prat et al., 2015) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। TNBC ହେଉଛି କର୍କଟ ରୋଗର ଏକ ଆଣବିକ ଉପପ୍ରକାର ଯାହା ସମସ୍ତ ER, PR, ଏବଂ HER2 ପ୍ରକାଶ କରେ ନାହିଁ (Yin et al., 2020)। ଏହି ରୋଗଗତ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକ TNBC ସହିତ ଜଡିତ, ଏହାର ଦ୍ରୁତ ଅଗ୍ରଗତି ଏବଂ ଅନ୍ୟ ଯେକୌଣସି ପ୍ରକାରର ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ପ୍ରକୃତିକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରେ (Feng et al., 2018)। ଏହା ସହିତ, Peru et al (2000) ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗକୁ ପୁନଃବର୍ଗୀକୃତ କରିବା ଏବଂ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ପାଞ୍ଚଟି ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଉପପ୍ରକାର ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋଆରେ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ (Cadenas, 2012)। Basal-ପରି ସ୍ତନ କର୍କଟ ହେଉଛି ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ଏକ ଉପପ୍ରକାର ଯାହାର ଏକ ଟ୍ରିପଲ୍-ନେଗେଟିଭ୍ ଫେନୋଟାଇପ୍ ଅଛି ଏବଂ ଏହା ଦ୍ରୁତ ଅଗ୍ରଗତି ସହିତ ଜଡିତ। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖ କରିବା ଉଚିତ ଯେ ସମସ୍ତ ବେସାଲ୍-ପରି ସ୍ତନ କର୍କଟକୁ ସାଧାରଣତଃ TNBC ଭାବରେ ଭୁଲ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ, କିନ୍ତୁ କେବଳ 77% TNBC ଅଟେ; ବିପରୀତରେ, 71-91% TNBC ହେଉଛି ବେସାଲ୍-ପରି, ଯାହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଏହି ଦୁଇ ପ୍ରକାରର ସ୍ତନ କର୍କଟ ଓଭରଲାପ୍ ହୁଏ ଏବଂ ଭିନ୍ନ ବର୍ଗୀକରଣକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ (ୱାଙ୍ଗ୍ ଡି.-ୱାଇ. ଏଟ୍ ଆଲ୍., 2019)। ଏହା ପୂର୍ବାନୁମାନ ସ୍ପଷ୍ଟ କରିବା ଏବଂ ବର୍ତ୍ତମାନ ଏବଂ ଭବିଷ୍ୟତର ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ TNBC ର ବିଷମତାକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ସୃଷ୍ଟି କରେ। ଏହା ସହିତ, TNBC ସମସ୍ତ ସ୍ତନ କର୍କଟ ମାମଲା ମଧ୍ୟରୁ 15-20% ପାଇଁ ଦାୟୀ ଏବଂ 50 ବର୍ଷରୁ କମ୍ ବୟସର ମହିଳାମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ଏହା ଅଧିକ ସାଧାରଣ। TNBC ମାମଲାରେ ପ୍ରାୟ 20% ରେ BRCA1 କିମ୍ବା BRCA2 ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017)। , 2020)। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଏହା ମଧ୍ୟ ଜଣାପଡିଛି ଯେ TNBC ର ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ସୂକ୍ଷ୍ମ ପରିବେଶ ଅଛି ଯେଉଁଥିରେ ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରର ଭାସ୍କୁଲାର୍ ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ ବୃଦ୍ଧି କାରକ, ଟ୍ୟୁମର-ସଂଯୁକ୍ତ ମ୍ୟାକ୍ରୋଫେଜ୍ (TAM), ଟ୍ୟୁମର-ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀ ଲିମ୍ଫୋସାଇଟ୍ (TIL), ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣରେ ଜଡିତ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅଣୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ତେଣୁ, TNBC ର ସୂକ୍ଷ୍ମ ପରିବେଶକୁ ବୁଝିବା ଏହାର ପୂର୍ବାନୁମାନ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (ଫାନ୍ ଏବଂ ହେ, 2022)।
TNBC ର ପୂର୍ବାନୁମାନ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ଏବଂ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଚିକିତ୍ସା ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ସଠିକ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ, ମୁଖ୍ୟତଃ ER, PR ଏବଂ HER2 ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଇମ୍ୟୁନୋହିଷ୍ଟୋକେମିଷ୍ଟ୍ରି (IHC) ଏବଂ ସ୍ତନ ନିଓପ୍ଲାଜମ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ମାମୋଗ୍ରାଫି ଉପରେ ଆଧାରିତ, ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ତଥାପି, ମାମୋଗ୍ରାଫି ନେକ୍ରୋସିସ୍ ଏବଂ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଭଳି ଇଣ୍ଟ୍ରାଟ୍ୟୁମୋରାଲ୍ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଭାବରେ ଚିତ୍ରଣ କରିପାରିବ ନାହିଁ (ଦୀପକ ସିଂହ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2021)। ଯେହେତୁ ଖରାପ ପୂର୍ବାନୁମାନ ଏବଂ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ଡାକ୍ତରମାନଙ୍କୁ ସଠିକ୍ ଔଷଧ ଲେଖିବାରେ ବାଧା ଦିଏ (ଚୌଧାରୀ, 2020), TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ଯତ୍ନ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ବର୍ତ୍ତମାନ, TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ପାଇଁ ଦୁଇଟି ଔଷଧ, ଡକ୍ସୋରୁବିସିନ୍ ଏବଂ ସାଇକ୍ଲୋଫସଫାମାଇଡ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଏବଂ ଭଲ ଫଳାଫଳ ଦେଖାଇଛି। ଏହା ସହିତ, ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପ୍ଲାଟିନମ୍ ଔଷଧ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ଯେପରିକି କାର୍ବୋପ୍ଲାଟିନ୍ ଏବଂ ସିସ୍ପ୍ଲାଟିନ୍ (ସିକୋଭ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2015)। ଏହା ସହିତ, TNBC ର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ସମ୍ଭାବ୍ୟ କେମୋଥେରାପି ଔଷଧ ଭାବରେ Olaparib, Velaparib, ଏବଂ PF-01367338 ପରି PARP ଇନହିବିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି (Ishino et al., 2018)। ଯେହେତୁ Wnt/b-Catenin, NOTCH, ଏବଂ Hedgehog ସିଗନାଲିଂ ପାଥୱେ TNBC ର ଘଟଣା ଏବଂ ଅଗ୍ରଗତିରେ ଜଡିତ ବୋଲି ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି, ଏହି ପାଥୱେଗୁଡ଼ିକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ରଣନୀତି ହୋଇପାରେ (Aysola et al., 2013)। ଯଦିଓ ସର୍ଜରୀ, ବିକିରଣ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ କେମୋଥେରାପି ଆଜି TNBC ର ଚିକିତ୍ସାର ମୁଖ୍ୟ ଆଧାର ରହିଛି, ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ ଥେରାପି, ଇମ୍ୟୁନୋଥେରାପି, ବିଭିନ୍ନ CRISPR-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ ଉପକରଣ ଯେପରିକି Cas9n, dCas9., CRISPR/Cas12, ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ, ଏବଂ CRISPR/Cas9-ଲକ୍ଷ୍ୟଯୁକ୍ତ ଜିନ୍ ଥେରାପି ସମେତ ନୂତନ ଚିକିତ୍ସା ବିକାଶରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରଗତି ହୋଇଛି। ଏଠାରେ ଆମେ TNBC ର ଚିକିତ୍ସାରେ ବ୍ୟବହୃତ ବିଭିନ୍ନ CRISPR-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ ଉପକରଣ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବୁ। ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ, CRISPR/Cas9 ବ୍ୟାପକ ଧ୍ୟାନ ପାଇଛି।
Cas9n, ଯାହାକୁ Cas9 ନିକେଜ୍ ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ, CRISPR/Cas9 ଜିନୋମ୍ ଏଡିଟିଂ ସିଷ୍ଟମ୍ (ଗୁପ୍ତା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2019) ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ Cas9 ପ୍ରୋଟିନର ଏକ ଜେନେଟିକାଲ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟର୍ଡ ପ୍ରକାର। ଏହାର ମୂଳ ରୂପରେ, Cas9 ପ୍ରୋଟିନ୍ ଦୁଇଟି ନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍ ଡୋମେନ୍ ଧାରଣ କରେ: RuvC ଏବଂ HNH, ଯାହାର ମୁଖ୍ୟ କାର୍ଯ୍ୟ ହେଉଛି ଉଭୟ DNA ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡର କ୍ଲିଭେଜ୍। ତଥାପି, Cas9n ରେ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍ ଡୋମେନ୍ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ, HNH, ଜେନେଟିକାଲ୍ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ହୋଇ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇଯାଏ। ତେଣୁ, Cas9n ର HNH ଡୋମେନ୍ ଅକାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ରହିଥାଏ। କେବଳ RuvC ଡୋମେନ୍ ସକ୍ରିୟ ରହିଥାଏ, ଯାହା Cas9n କୁ ଏକକ DNA ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡରେ କାଟିବା କିମ୍ବା ବ୍ରେକ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ (ଟ୍ରେଭିନୋ ଏବଂ ଝାଙ୍ଗ, 2014)। Cas9 ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, Cas9n ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଅଫ-ଟାର୍ଗେଟ୍ ପ୍ରଭାବକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ ଏବଂ କୋଷ ମରାମତି ଯନ୍ତ୍ରପାତିକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବ। Cas9n କୁ ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡେଡ୍ DNA ରେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସ୍ଥାନରେ ବ୍ରେକ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ଭଳି ବିଭିନ୍ନ ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। ଏହି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ, ଦୁଇଟି Cas9n ଅଣୁକୁ ଏକାଠି ଏବଂ ଏକାଠି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା (Yee, 2016)। ମିଶ୍ରିତ ବଂଶ କାଇନେଜ୍ 3 (MLK3) ହେଉଛି ଏକ ମାଇଟୋଜେନ୍-ସକ୍ରିୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ ଯାହା TNBC ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ସମୟରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ନିୟାମକ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ (କ୍ରୋନାନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2012)।
MLK3 TNBC ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଆଡ଼କୁ ନେଇଯାଉଥିବା ଏକାଧିକ ସିଗନାଲିଂ ପଥକୁ ସକ୍ରିୟ କରିପାରିବ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, c-Jun N-ଟର୍ମିନାଲ କାଇନେଜ୍ (JNK) ପଥ କୋଷ ଗତିଶୀଳତା ଏବଂ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସ ଅବନତିକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ, ଏବଂ MLK3 JNK ପଥକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା କୋଷ ଗତିଶୀଳତା ବୃଦ୍ଧି କରେ ଏବଂ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ଗୁଣ ପ୍ରଦାନ କରେ (Rattanasinchai and Gallo, 2016)। MLK3 EMT କୁ ମଧ୍ୟ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ। ଏହା କରିବା ପାଇଁ, ଏହା ସ୍ନେଲ୍, ସ୍ଲଗ୍ ଏବଂ ଟ୍ୱିଷ୍ଟ ଭଳି ଡାଉନଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କାରକଗୁଡ଼ିକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ। ଏହି କାରକଗୁଡ଼ିକ ଏପିଥେଲିୟଲ୍ ମାର୍କରଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରକାଶନକୁ ବାଧା ଦିଏ ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାଟିକ୍ ଫେନୋଟାଇପ୍ (Casalino et al., 2023) ହାସଲ କରେ। MLK3 ECM ପୁନଃନିର୍ମାଣ ଏବଂ ECM କୁ ଅବନତି କରୁଥିବା ମାଟ୍ରିକ୍ସ ମେଟାଲୋପ୍ରୋଟିନେଜ୍ (MMPs) ଭଳି ପ୍ରୋଟିଏଜ୍ ସକ୍ରିୟ କରିବାରେ ଏକ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରୁଥିବା ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଛି। ଏହା ଟ୍ୟୁମର କୋଷ ଆକ୍ରମଣକୁ ସହଜ କରିଥାଏ ଏବଂ ଦୂର ସ୍ଥାନକୁ ବ୍ୟାପିଥାଏ (Katari et al., 2019)। ତେଣୁ, ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ MLK3 TNBC ରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। MLK3 ର ଭୂମିକା ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପାଇଁ Rattanasinchai ଏବଂ Gallo TNBC ମଡେଲ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ ଏବଂ ଜାଣିପାରିଲେ ଯେ ଏହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସଙ୍କେତିକ ପଥ ମାଧ୍ୟମରେ କର୍କଟ ବିକାଶକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ। ସେମାନେ MLK3 କୁ ସମ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9n ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ ଏବଂ TNBC ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ହ୍ରାସ ଦେଖିଥିଲେ (Rattanasinchai ଏବଂ Gallo, 2016)।
dCas9, ଯାହାକୁ ପ୍ରାୟତଃ ନିଷ୍କ୍ରିୟ Cas9 କୁହାଯାଏ, ଏହା Cas9 ପ୍ରୋଟିନର ଏକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ରୂପ। ସକ୍ରିୟ Cas9 ପରି ନୁହେଁ, dCas9 ରେ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଅଭାବ ଅଛି, ଯାହା ଏହାକୁ DNA ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ବ୍ରେକ୍ ପ୍ରେରିତ କରିବାରେ ଅସମର୍ଥ କରିଥାଏ। ତେଣୁ, DNA କ୍ରମରେ କୌଣସି ପରିବର୍ତ୍ତନ କିମ୍ବା ପରିବର୍ତ୍ତନ ବିନା ଜିନୋମର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅଞ୍ଚଳଗୁଡ଼ିକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା ପାଇଁ dCas9 ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ (ୱାଙ୍ଗ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2016)। dCas9 ରେ, ଦୁଇଟି ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍, RuvC ଏବଂ HNH, ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ଦମନ କରି ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇଯାଏ। (ରିକ୍ଟର ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2016)। DNA କ୍ଲିଭେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଅଭାବ ସତ୍ତ୍ୱେ, dCas9 ଜେନେଟିକ୍ ଗବେଷଣା ଏବଂ ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜିରେ ଅନେକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଏହା ଜିନୋମର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅଞ୍ଚଳଗୁଡ଼ିକର ଦୃଶ୍ୟକରଣକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣକୁ ସହଜ କରେ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ (ବ୍ରୋକେନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2018)।
ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ ଫ୍ୟାକ୍ଟର ZEB1 (ଜିଙ୍କ ଫିଙ୍ଗର ଇ-ବକ୍ସ ବାଇଣ୍ଡିଂ ହୋମୋବକ୍ସ 1) ଏପିଥେଲିଆଲ୍-ମେସେନକାଇମାଲ ଟ୍ରାଞ୍ଜିସନ୍ (EMT) ମଧ୍ୟସ୍ଥତାରେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଏବଂ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, ଏହା ଏକ କୋଷୀୟ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଯାହା ଭ୍ରୁଣ ବିକାଶ, ଟିସୁ ମରାମତି ଏବଂ କର୍କଟ ଅଗ୍ରଗତି ସମୟରେ ଘଟେ। ଏଥିରେ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡିକ ମେସେନକାଇମାଲ କୋଷରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇଥାଏ, ଯାହା ଫଳରେ କୋଷ ଆକୃତି, ଗତିଶୀଳତା, ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକତା ଇତ୍ୟାଦିରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଆସେ। (Wu et al., 2020)। ZEB1 TNBC (ମୋରେନୋ-ବୁଏନୋ et al., 2008) ରେ କୋଷ-କୋଷ ଆଡ଼ସେସନ୍ ଏବଂ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡିକର ଧ୍ରୁବୀତ୍ୱ ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ଦାୟୀ, E-କ୍ୟାଡେରିନ୍ ଏବଂ ଓକ୍ଲୁଡିନ୍ ଭଳି ଅନେକ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ ମାର୍କରଗୁଡ଼ିକୁ ବାଧା ଦିଏ। ଏହା ସହିତ, ZEB1 କିଛି ମାର୍କର ଯେପରିକି N-କ୍ୟାଡେରିନ୍, ଭିମେଣ୍ଟିନ ଏବଂ ଫାଇବ୍ରୋନେକ୍ଟିନ୍ (Konradi et al., 2014) କୁ ସକ୍ରିୟ କରେ ଏବଂ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ପୁନଃନିର୍ମାଣରେ ଜଡିତ ଜିନ୍ ଯେପରିକି Rho GTPases ଏବଂ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ମେଟାଲୋପ୍ରୋଟିନେସେସ୍ (MMPs) (ହୁଆଙ୍ଗ) କୁ ମଧ୍ୟ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ। et al., 2014). 2022), ଏହା ସହିତ, ଏହା ବିଭିନ୍ନ ସଙ୍କେତିକ ପଥଗୁଡ଼ିକୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ଯେପରିକି ରୂପାନ୍ତରିତ ବୃଦ୍ଧି କାରକ-β (TGF-β), Wnt ସଙ୍କେତିକ, ଇତ୍ୟାଦି, ଯାହା ଦ୍ଵାରା TNBC ରେ ଟ୍ୟୁମର ଆକ୍ରମଣ ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ (ଚେନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2016)। ଅନେକ ଅଧ୍ୟୟନ ଏବଂ ବୈଜ୍ଞାନିକ ପ୍ରମାଣ ସୂଚିତ କରେ ଯେ TNBC ର ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସାଗତ ହସ୍ତକ୍ଷେପ ପାଇଁ ZEB1 ର ଏକ ମୂଲ୍ୟବାନ ଏଜେଣ୍ଟ ଭାବରେ ମହାନ ସମ୍ଭାବନା ଅଛି। ଏକ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରେ, ୱାରିଆହ ଏଟ୍ ଅଲ୍. ଏକ TNBC ମଡେଲ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ ଏବଂ dCas9 ଦ୍ୱାରା ZEB1 ର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଦମନ ହାସଲ କରିଥିଲେ। ଏହିପରି, ସେମାନେ ଭିଭୋ ପରିସ୍ଥିତିରେ ZEB1 ର ବହୁତ ଉଚ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ପ୍ରାୟ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ନିରୋଧ ପର୍ଯ୍ୟବେକ୍ଷଣ କରିଥିଲେ (ୱାରିଆହ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2023)।
CRISPR/Cas12 ହେଉଛି CRISPR/Cpf1 ନାମକ ଏକ ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ ଉପକରଣ। ଏହା CRISPR/Cas ସିଷ୍ଟମରୁ ଆସିଛି, ଯେଉଁଠାରେ Cas12 ଶବ୍ଦଟି CRISPR-ସମ୍ପର୍କିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ 12 (ଭାରତକୁମାର ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2022) କୁ ବୁଝାଏ, ଯାହା Cas9 ସହିତ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସମାନ। ଏକମାତ୍ର ପାର୍ଥକ୍ୟ ହେଉଛି ଏଥିରେ Cas12 ପ୍ରୋଟିନ୍ ଅଛି। Cas9 ତୁଳନାରେ, Cas12 ର କିଛି ଅନନ୍ୟ କାର୍ଯ୍ୟ ଅଛି ଯେପରିକି ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ଷ୍ଟିକି ଏଣ୍ଡ ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଯେତେବେଳେ Cas9 ବ୍ଲଣ୍ଟ ଏଣ୍ଡ ସୃଷ୍ଟି କରେ (ୱାଙ୍ଗ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2021)। Cas12 ର ଏହି ଗୁଣ ଏହାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ DNA ହେରଫେର ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟାରେ ଅବଦାନ ରଖେ। ଟାର୍ଗେଟ DNA କୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଚିହ୍ନିବା ଏବଂ କାଟିବାରେ ସକ୍ଷମ ଏକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଭାବରେ, ଏହାର ଅସାଧାରଣ ବହୁମୁଖୀତା ଅଛି, ଯାହା ଏହାକୁ ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ (Pickar-Oliver ଏବଂ Gersbach, 2019) ସମେତ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଉପକରଣ କରିଥାଏ।
ଅନ୍ୟ CRISPR ପ୍ରକାରଗୁଡ଼ିକ ପରି, CRISPR/Cas12 ମଧ୍ୟ TNBC ରେ ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ନକ୍ଆଉଟ୍ କିମ୍ବା ସକ୍ରିୟ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ, ଯାହା ଏହାର ରୋଗଜନିତତା କିମ୍ବା ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରୁଥିବା ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ କରିଥାଏ (Yang and Zhang, 2023)। ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ସଫଳ କରିବା ପାଇଁ, ଏକ ଗାଇଡ୍ RNA (gRNA) ବିକଶିତ ହୋଇଥିଲା ଯାହା Cas12 କୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍କୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ କରିଥାଏ। Cas12 ଏହାର ଟାର୍ଗେଟ୍ ସହିତ ଯୋଡ଼ି ହେବା ପରେ, ଏହା DNA ରେ ଡବଲ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ବ୍ରେକ୍ ପ୍ରବର୍ତ୍ତନ କରେ ଏବଂ DNA ମରାମତି ଯନ୍ତ୍ରକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ। ମରାମତି ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, ଭୁଲ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ଜିନ୍ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ହ୍ରାସ କରିଥାଏ (Zhang et al., 2021a)। ଏହା ସହିତ, Cas12 ଏନଜାଇମର ଏକ ଉନ୍ନତ ସଂସ୍କରଣ (dCas12 କୁହାଯାଏ) ମଧ୍ୟ ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସକ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଏହାକୁ ଏକ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଆକ୍ଟିଭେଟର ସହିତ ମିଶ୍ରଣ କରି, କିଛି ଜିନ୍କୁ ପ୍ରେରିତ କରିବା ସମ୍ଭବ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା ସେମାନଙ୍କୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ। ଏହି ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟାର ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକର ସକ୍ରିୟକରଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବାରେ ବହୁତ ସମ୍ଭାବନା ଅଛି (Sultan et al., 2022)।
ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ଏକ ନୂତନ ଭାବରେ ବିକଶିତ ଏବଂ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଜିନୋମ୍ ଏଡିଟିଂ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା। ଏହା ଏକ ଜୀବର DNAକୁ ବହୁତ ସଠିକ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ (ଚେନ୍ ଏବଂ ଲିଉ, 2023)। ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ଦୁଇଟି ମୁଖ୍ୟ ଉପାଦାନର ଏକୀକରଣ ମାଧ୍ୟମରେ ହାସଲ କରାଯାଏ: ଏକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ CRISPR/Cas9 ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟେଜ୍। CRISPR/Cas9 ଏନଜାଇମର ଭୂମିକା ହେଉଛି ଜିନୋମର ସଠିକ୍ ସ୍ଥାନଗୁଡ଼ିକୁ ଚୟନମୂଳକ ଭାବରେ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା, ଯେତେବେଳେ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟେଜ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟ ସ୍ଥାନରେ DNAକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ (ହାସାନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2021)। ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ମେକାନିଜିମ୍ରେ, ପ୍ରଥମ ପଦକ୍ଷେପରେ ଏକ ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ଗାଇଡ୍ RNA (pegRNA) (Standage-Beier ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2021) ସୃଷ୍ଟି କରିବା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଏଥିରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ DNAରେ ଇଚ୍ଛିତ ଏଡିଟିଂ ସାଇଟ୍ ସହିତ ଅନୁରୂପ ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମ ଏବଂ RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଥାଏ। ତା'ପରେ pegRNA କୁ ଏକ ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ (PE2) ସହିତ ଲକ୍ଷ୍ୟ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ପ୍ରବେଶ କରାଯାଏ। PE2 ହେଉଛି ଏକ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଯେଉଁଥିରେ Cas9 ଏନଜାଇମ୍, ଏକ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟେଜ୍ ଏବଂ ଏକ ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ଆଡପ୍ଟର (ମାର୍ଟିନ୍-ଆଲୋନ୍ସୋ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2021) ଥାଏ। କୋଷ ଭିତରେ, pegRNA ଏବଂ PE2 କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସଗୁଡ଼ିକ ସେମାନେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାକୁ ଚାହୁଁଥିବା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ DNA ଖୋଜନ୍ତି। Cas9 ଏନଜାଇମ DNA କୁ କାଟି ଏକକ ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ (Choi et al., 2022)। ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟେଜ୍ ଏହି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି DNA କୁ ସମ୍ପାଦନା ପାଇଁ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରେ। DNA କପି କରିବା ସହିତ, RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସମ୍ପାଦନା ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଶେଷରେ, ନୂତନ ଭାବରେ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା DNA ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡକୁ DNA ରେ ଥିବା ଭଙ୍ଗକୁ ମରାମତି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ଯାହା ଫଳରେ ଏକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ DNA କ୍ରମ ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ ଯେଉଁଥିରେ ଇଚ୍ଛିତ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଥାଏ (Ochoa-Sanchez et al., 2021)। ପ୍ରାଇମର ଏଡିଟିଂ ମେକାନିଜିମ୍ ଜିନରେ ବ୍ୟାପକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୋଇପାରେ। ଏହା ପଏଣ୍ଟ ମ୍ୟୁଟେସନ୍, ଇନସର୍ସନ୍, ଡିଲିସନ୍ ଏବଂ ଜିନ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନକୁ ମଧ୍ୟ ଟାର୍ଗେଟ କରିପାରିବ (Anzalone et al., 2019; Chen and Liu, 2023)। ପ୍ରାଇମ୍ ଏଡିଟିଂ ପୂର୍ବ ଜିନୋମ୍ ଏଡିଟିଂ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ତୁଳନାରେ ଅନେକ ସୁବିଧା ପ୍ରଦାନ କରେ। ଏଥିରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ସଠିକତା, ହ୍ରାସ ହୋଇଥିବା ଅଫ-ଟାର୍ଗେଟ୍ ପ୍ରଭାବ ଏବଂ DNA ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡ ବ୍ରେକ୍ ଉପରେ ନିର୍ଭର ନକରି DNA ସମ୍ପାଦନା କରିବାର କ୍ଷମତା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ (Anzalone et al., 2020)।
CRISPR/Cas9 ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ମୂଳତଃ ପ୍ଲାଜମିଡ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଏବଂ ଫେଜ୍ ସଂକ୍ରମଣରୁ ଜୀବାଣୁକୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେବା ପାଇଁ ବିକଶିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ପରେ ଜିନୋମ୍ ସମ୍ପାଦନା ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ RNA-ଆଧାରିତ DNA ଟାର୍ଗେଟିଂ ଉପକରଣ ଭାବରେ ପୁନଃଉଦ୍ୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା (ଜିଆଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ଡୌଡନା, 2017)। ଏହା ସହିତ, CRISPR/Cas9 ସିଷ୍ଟମ୍ ଯଥାକ୍ରମେ 50% ଏବଂ 87% ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ଆର୍କିଏଲ୍ ଜିନୋମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି (ଇଶିନୋ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2018)। CRISPR/Cas9 ହେଉଛି ଭିଭୋ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ମୋଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଯେକୌଣସି ଅସ୍ୱାଭାବିକ ଜେନେଟିକ୍ କ୍ରମକୁ ବିଲୋପ, ପ୍ରବେଶ ଏବଂ ସଂଶୋଧନ ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଉପକରଣ (ସାବିଟ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। ଅଧିକନ୍ତୁ, CRISPR/Cas9 ଆଗ୍ରହର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ପାଇଁ ଏହାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଯୋଗୁଁ ଅନୁକୂଳନ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀର ଅଂଶ ଭାବରେ ଦେଖାଯାଇଛି (ଚେନ୍ ଏବଂ ଝାଙ୍ଗ୍, 2018)।
CRISPR/Cas9 ରେ Cas9 ଏବଂ ଏକକ ଗାଇଡ୍ RNA (sgRNA) ରହିଛି। Cas9 ହେଉଛି ଏକାଧିକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଉପାଦାନରେ ଗଠିତ ଏକ ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍। ଏହା ସହିତ, Cas9 ର ଅନନ୍ୟ ଗଠନାତ୍ମକ ଏବଂ ସଂରଚନାତ୍ମକ ଗୁଣ (Pacesa et al., 2022) ଅଛି କାରଣ ଏଥିରେ ଦୁଇଟି ଲୋବ୍ ଅଛି: ଚିହ୍ନଟକରଣ (REC) ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ (NUC)। REC ଲୋବ୍ ଆହୁରି ତିନୋଟି ଅଞ୍ଚଳରେ ବିଭକ୍ତ: REC1, REC2, ଏବଂ ବ୍ରିଜ୍ ହେଲିସେସ୍ (Cromwell et al., 2018)। NUC ରେ ତିନୋଟି ଲୋବ୍ ଅଛି, ଯଥା RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH ଏବଂ ପ୍ରୋଟୋସ୍ପେସର୍ ସଂଲଗ୍ନ ମୋଟିଫ୍ (PAM) ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଡୋମେନ୍ (ଚିତ୍ର 1) (Song et al., 2016)। sgRNA ରେ CRISPR RNA (crRNA) ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସକୋଡିଂ କ୍ଷୁଦ୍ର RNA (ଟ୍ରେସର RNA) (ଚିତ୍ର 1) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। sgRNA ରେ ଦୁଇଟି ଉପାଦାନ ଅଛି। sgRNA ଏକ ସକ୍ରିୟ ଜଟିଳ ଗଠନ କରିବା ପାଇଁ Cas9 ପ୍ରୋଟିନକୁ କନେକ୍ସିନ୍ସ ସହିତ ସଂଯୋଗ କରେ, ଯାହାକୁ ଇଫେକ୍ଟର ଜଟିଳ ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ (ରିକ୍ଟର ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2012)। crRNA ହେଉଛି ଏକ 18-20 ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ବେସ୍ ଯୋଡ଼ା ଯାହା ଟାର୍ଗେଟ DNA କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଏହା ସହିତ, crRNA ଟାର୍ଗେଟ DNA ସହିତ ଯୋଡ଼ା ହୁଏ, ଏବଂ tracrRNA ଟାର୍ଗେଟ DNAକୁ ବାନ୍ଧିବା ପାଇଁ Cas9 ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ (ମାଙ୍ଘୱାର ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2019)। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, PAM କ୍ରମରେ 3ଟି ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ଅଛି, ଯାହା ଇଫେକ୍ଟର ଜଟିଳର DNA ସହିତ ବନ୍ଧନକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରେ, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କରେ ଏବଂ ମଧ୍ୟସ୍ଥତା କରେ। Cas9 ପ୍ରୋଟିନ୍ ଜଟିଳ ସବୟୁନିଟ୍ RuvC ଏବଂ HNH ର ଉତ୍ପ୍ରକାଶକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି (ରିକ୍ଟର ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2012; ଆସମାମାଓ ଏବଂ ଜାୱଡି, 2021)। Cas9 ସବୟୁନିଟ୍ ର HNH ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଜ୍ ଡୋମେନ୍ crRNA ସହିତ ଜଡିତ DNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡକୁ ବିଭାଜିତ କରେ। RuvC ନ୍ୟୁକ୍ଲିଏଜ୍ ଡୋମେନ୍ ଅନ୍ୟ DNA ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବିଭାଜିତ କରେ ଏବଂ ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରେଣ୍ଡ ବ୍ରେକ୍ (DSBs) ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଯାହା ପରେ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ DNA ବ୍ରେକ୍ ମରାମତି ଯନ୍ତ୍ର ସକ୍ରିୟ ହୁଏ (Jiang and Doudna, 2017) (ଚିତ୍ର 1)।
ଚିତ୍ର 1. CRISPR/Cas9 (A) ର ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ବିବରଣୀ। CRISPR/Cas9 ସିଷ୍ଟମର ଉପାଦାନ: (i). Cas9 ଏଣ୍ଡୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟ DNA କ୍ରମକୁ କାଟିବା ପାଇଁ ଦାୟୀ, (ii) crRNA ଏବଂ tra-crRNA chimeras ର ମିଶ୍ରଣରୁ ସୃଷ୍ଟି ହେଉଥିବା ଏକକ ମାର୍ଗଦର୍ଶିକା (sg) RNA। (ଦୁଇଟି)। Cas9 ରେ Rec I, Rec II, NUC lobe (HNH ଏବଂ Ruv C ହେଉଛି ଉପ-ଉପାଦାନ) ଏବଂ PAM ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଡୋମେନ୍ (C) ଭଳି ଅନେକ ଉପାଦାନ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା ଅନୁରୂପ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥାଏ। CRISPR/Cas9 ପ୍ରୋଟିନ୍ ଜଟିଳ DNA କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ଅଣ-ପରିପୂରକ ଏବଂ ପରିପୂରକ ରୂପ (D) ରେ ବିଭକ୍ତ କରେ। CRISPR/Cas9 ତିନୋଟି ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଜିନୋମକୁ ସମ୍ପାଦନ କରେ: ଚିହ୍ନଟ, କଟା ଏବଂ ମରାମତି। ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଥିବା sg-RNA Cas9 କୁ ମାର୍ଗଦର୍ଶନ କରେ ଏବଂ ପରିପୂରକ ଉପାଦାନ crRNA ମାଧ୍ୟମରେ ଇଚ୍ଛିତ କ୍ରମକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ। Cas9 5′-NGG-3′ ରେ PAM କ୍ରମକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ ଏବଂ DNA କୁ ତରଳାଇଥାଏ, ଏକ DNA-RNA ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଗଠନ କରେ ଏବଂ କ୍ଲିଭେଜ୍ ସକ୍ରିୟ କରେ। Cas9 ର HNH ଡୋମେନ୍ ପରିପୂରକ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡକୁ ବିଭାଜିତ କରେ, ଏବଂ RuvC ଡୋମେନ୍ ଅଣ-ପରିପୂରକ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡକୁ ବିଭାଜିତ କରେ। CRISPR/Cas9 ଦୁଇଟି ଉପାୟରେ ଭାଙ୍ଗି dsDNA ମରାମତି କରେ: ନନ୍-ହୋମୋଲୋଗସ୍ ଏଣ୍ଡ ଜଏନ୍ (NHEJ) ଏବଂ ହୋମୋଲୋଜି-ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ମରାମତି (HDR)। NHEJ ଏକ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ମାଧ୍ୟମରେ ବିଦେଶୀ ହୋମୋଲୋଗସ୍ DNA ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ଡବଲ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA ମରାମତି କରେ, ଏକ ତ୍ରୁଟି-ପ୍ରବଣ ଯନ୍ତ୍ର ଯାହା ଅନିୟମିତ DNA କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରବେଶ କିମ୍ବା ଅପସାରଣ କରିପାରିବ। HDR ବହୁତ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଏବଂ ହୋମୋଲୋଗସ୍ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ।
CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥ ମରାମତି ପଥଗୁଡ଼ିକରେ ନନ୍-ହୋମୋଲୋଗସ୍ ଏଣ୍ଡ୍ ଜଏନ୍ (NHEJ) ଏବଂ ହୋମୋଲୋଜି-ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ମରାମତି (HDR) ମେକାନିଜିମ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। NHEJ ଏକ ତ୍ରୁଟି-ପ୍ରବଣ ପଥ କାରଣ ଏଥିରେ ପ୍ରବେଶ କିମ୍ବା ବିଲୋପ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଏବଂ ମରାମତି ଯନ୍ତ୍ର ସମୟରେ କୌଣସି ପ୍ୟାଟର୍ନର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ। ଏହା ମାନକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ଅନିୟମିତ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରେ (Abbasi et al., 2021)। ଏହି ମରାମତି ପ୍ରଣାଳୀରେ KU କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ, କ୍ରସ୍-କମ୍ପ୍ଲିମେଣ୍ଟିଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଟାଇପ୍ 4 (XRCC-4), DNA ଏଣ୍ଡ୍ ପ୍ରୋସେସିଂ ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021) ଭଳି ଚାରୋଟି କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ରହିଛି। KU ଜଟିଳ ପ୍ରୋଟିନର ଦୁଇଟି ସବୟୁନିଟ୍, Ku 70 ଏବଂ Ku 80 ଅଛି, ଏବଂ ଏହା NHEJ ମେକାନିଜିମରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, କାରଣ ମରାମତି ମେକାନିଜିମ ଦୁଇଟି ସବୟୁନିଟ୍ (Ku 70 ଏବଂ Ku 80) କୁ ଟାର୍ଗେଟ DNA ର ଶୂନ୍ୟ କିମ୍ବା ପ୍ରାୟ ଶୂନ୍ୟ ପ୍ରାନ୍ତ ସହିତ ବାନ୍ଧିବା ଦ୍ୱାରା ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥାଏ (Abbasi et al., 2021), ଆଘାତ ସ୍ଥାନରେ ଅନ୍ୟ NHEJ-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ କାରକମାନଙ୍କୁ ନିଯୁକ୍ତି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍କାଫୋଲ୍ଡ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ (Yang et al., 2020)। XRCC-4 ଏବଂ DNA ଲିଗେଜ୍ ଯଥାକ୍ରମେ 334 ଏବଂ 911 ଆମିନୋ ଏସିଡରେ ଗଠିତ, ଏବଂ XRCC4-DNA ଲିଗେଜ୍ IV କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ DNA ଶେଷ ପ୍ରାନ୍ତର ବନ୍ଧନକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରେ (Chattarjee et al., 2015)। DNA ଶେଷ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ଏନଜାଇମ୍, ଯାହାକୁ ପଲିନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟ୍ରାଇଟିଡ୍ କାଇନେଜ୍ 3′-ଫସଫେଟ୍ ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ, ଏକ DNA ଶେଷ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ଏନଜାଇମ୍। ଏହା DNA ରେ 3′P ଗ୍ରୁପ୍ କୁ ଅପସାରଣ କରିପାରିବ ଏବଂ DSB ମରାମତି ସମୟରେ 5′OH ଗ୍ରୁପ୍ କୁ ଫସଫୋରାଇଲେଟ୍ କରିପାରିବ। ଏଥିରେ SSB ମରାମତି ପଥ ବ୍ୟବହାର କରି ସିଙ୍ଗଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ବ୍ରେକ୍ (SSBs) ର ମରାମତି ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ (ଚାଟର୍ଜୀ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2015)। ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ DNA-PKcs ହେଉଛି ଏକ DNA-ନିର୍ଭରଶୀଳ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ ଯାହା PIKKs (ଫସଫାଟିଡାଇଲିନୋସିଟଲ୍ 3-କିନେଜ୍-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ କାଇନେଜ୍) ଏବଂ ଆଟାକ୍ସିଆ ଟେଲାଙ୍ଗିଏକ୍ଟାସିଆ ମ୍ୟୁଟେଟେଡ୍ (ATM) ପରିବାରର ଏକ ଉତ୍ପ୍ରବାହୀ ସବୟୁନିଟ୍, ଏବଂ ATM ଏବଂ Rad3-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ATRs ଧାରଣ କରିଥାଏ। ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ବ୍ରେକ୍ (DSBs) ଏବଂ ସିଙ୍ଗଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ବ୍ରେକ୍ (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016)।
HDR ଏକ ଅଧିକ ସଠିକ୍ ଏବଂ ଉପଯୁକ୍ତ ମରାମତି ପ୍ରକ୍ରିୟା କାରଣ ସୂଚନାକୁ homologous DNA ଡୁପ୍ଲେକ୍ସର ଅକ୍ଷତ ରୂପ ବ୍ୟବହାର କରି ନକଲ କରାଯାଏ, ଯଦିଓ ଏଥିପାଇଁ ଭଉଣୀ କ୍ରୋମାଟିଡ୍ସର ଉପସ୍ଥିତି ଆବଶ୍ୟକ। ଏହା ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ କୋଷ ଚକ୍ରର S/G2 ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସମୟରେ ଘଟେ। HDR ମୁଖ୍ୟତଃ ଇଷ୍ଟ ପ୍ରଜାତିରେ ଘଟେ, କିନ୍ତୁ NHEJ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (ବର୍ମା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2006; ଆବାସି ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ମରାମତି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଚିତ୍ର 1 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।
ଯେହେତୁ TNBC ଜେନେଟିକ୍ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ଅସାଧାରଣତା ଦ୍ୱାରା ହୋଇଥାଏ, CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ମାଲିଗ୍ନାଣ୍ଟ ଜିନୋମିକ୍/ଏପିଜେନୋମିକ୍ ଅସାଧାରଣତା ସଂଶୋଧନ ଏକ ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ଚିକିତ୍ସା ପଦ୍ଧତି ହୋଇପାରେ (ଚେନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2019)। ଏହା ସହିତ, କୋଷ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଜଡିତ କିଛି ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କାରକ କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଅନନ୍ୟ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିପାରନ୍ତି, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କର୍କଟ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏକ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ପଦ୍ଧତି ହୋଇପାରେ (ଡ୍ରୋଷ୍ଟ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2017)। ଔଷଧ ବିକାଶ ପାଇଁ ଟ୍ୟୁମରର ଏହି ଆଣବିକ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ, ଯେପରିକି ଜେନେଟିକ୍, ଏପିଜେନେଟିକ୍ ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ତ୍ରୁଟିଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଦ୍ୱାରା କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଫଳାଫଳକୁ ଉନ୍ନତ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଖର୍ଚ୍ଚ ହ୍ରାସ କରାଯାଇପାରିବ। CRISPR ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ ଉପକରଣ ଯାହା କେବଳ କର୍କଟ-କାରକ ଜିନୋମିକ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ ନାହିଁ, ବରଂ ମାନବ କୋଷରେ ଅନ୍କୋଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ପାଦନ, ଦମନ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବା ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ (ସାରଣୀ 1) (ଅହମଦ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। ଟ୍ୟୁମର ଦମନକାରୀ, ଅନ୍କୋଜିନ୍ ଏବଂ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍ ଖୋଜିବା ପାଇଁ ଅନେକ CRISPR ସ୍କ୍ରିନ୍ କରାଯାଇଛି। ବିଭିନ୍ନ TNBC ଅନ୍କୋଜିନ୍ ସମ୍ପାଦନ ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ର ବ୍ୟବହାର ଚିତ୍ର 2 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।
ଚିତ୍ର 2. CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ବିଭିନ୍ନ TNBC ଅଙ୍କୋଜିନର ଜିନ୍ ଏଡିଟିଂ ଫଳରେ ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ହ୍ରାସ ପାଏ। ଏହି ଅଙ୍କୋଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକରେ CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 ଏବଂ CXCR7, Crypto1, ROR1 ଏବଂ ST8SIA ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା TNBC ର ଘଟଣା ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ସହିତ ଜଡିତ।
କର୍କଟ କୋଷ ସ୍ଥାନାନ୍ତର, ଆକ୍ରମଣ ଏବଂ ଏପିଥେଲିୟଲ୍-ମେସେନକାଇମାଲ୍ ଟ୍ରାଞ୍ଜିସନ୍ (EMT) ITGA9 ସହିତ ଜଡିତ। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ITGA9 ନଚ୍ ପାଥୱେରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଖେଳାଳି ଏବଂ ରାବଡୋମିଓସାର୍କୋମା ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ (ମୋଲିଷ୍ଟ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020) ରେ ଏକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ଏହା ସହିତ, ITGA9 ସ୍ତନ କର୍କଟ (ୱାଙ୍ଗ ଜେଡ୍. ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2019) ସମେତ ଅନେକ ଟ୍ୟୁମର ପ୍ରକାରରେ ରୋଗୀର ପୂର୍ବାନୁମାନ ସହିତ ଘନିଷ୍ଠ ଭାବରେ ଜଡିତ ଥିବା ଜଣାପଡିଛି। ଏହା ସହିତ, ITGA9 ର ବାୟୋଇନଫର୍ମେଟିକ୍ସ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦେଖାଇଛି ଯେ TNBC ରେ ଏହାର ପ୍ରକାଶନ ଅନ୍ୟ ସ୍ତନ କର୍କଟ ଉପପ୍ରକାର ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ ଥିଲା। TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ITGA9 ସ୍ତର ବୃଦ୍ଧି ଟ୍ୟୁମର ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତି ସହିତ ଜଡିତ। CRISPR/Cas9 ଦ୍ୱାରା ITGA9 ର ନକଆଉଟ୍ ଫଳରେ କର୍କଟ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍ (CSC)-ପରି ଗୁଣ, ଟ୍ୟୁମର ଆଞ୍ଜିଓଜେନେସିସ୍, ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ TNBC ରେ β-କ୍ୟାଟେନିନ୍ ଅବକ୍ଷୟକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରି ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ହ୍ରାସ ପାଇଲା (ୱାଙ୍ଗ ଜେଡ୍. ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2019)।
କ୍ରିପ୍ଟୋ-1 ଟିଜିଏଫ୍-β ପରିବାରର ଏକ ସଦସ୍ୟ ଏବଂ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଭ୍ରୁଣ ସୃଷ୍ଟି, ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ ଏବଂ କର୍କଟ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (ଇଶି ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। ଟିଡିଜିଏଫ୍-1 ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା, ଏହା ଏକ ଅଙ୍କୋଜେନିକ୍ GPI-ଆଙ୍କର୍ଡ ସିଗନାଲିଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଯାହା ଆଦିମ ଷ୍ଟ୍ରିକ୍, ମେସୋଡର୍ମ ଏବଂ ଏଣ୍ଡୋଡର୍ମ ଗଠନର ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଜଡିତ, ଏବଂ ଭ୍ରୁଣ ସୃଷ୍ଟି ସମୟରେ ଶରୀର ଅଙ୍ଗଗୁଡ଼ିକର ବିକାଶରେ ବାମ/ଡାହାଣ ଅସମତା ସ୍ଥାପନରେ ଜଡିତ (ଜାଙ୍ଗ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021b)। ଏହା ସହିତ, କ୍ରିପ୍ଟୋ-1 ଷ୍ଟେମ୍ କୋଷ ମାର୍କର ଭାବରେ ଏପିଥେଲିଆଲ୍-ମେସେନକାଇମାଲ୍ ଟ୍ରାଞ୍ଜିସନ୍ (EMT) ରେ ଜଡିତ ଥିବା ଦେଖାଯାଇଛି (ଜାଙ୍ଗ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021b)। ଇଏମ୍ଟି କେବଳ ଭ୍ରୁଣ ବିକାଶ, ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଏବଂ କ୍ଷତ ଆରୋଗ୍ୟ ଭଳି ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପାଇଁ ନୁହେଁ, ବରଂ କର୍କଟ ଆକ୍ରମଣ ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ଜଡିତ। ଏହା ସହିତ, କ୍ରିପ୍ଟୋ-୧ ଚାରୋଟି ନଚ୍ ରିସେପ୍ଟର ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କରୁଥିବା ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଅନୁବାଦ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରିପକ୍ୱତାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରୁଥିବା ଦେଖାଯାଇଛି (ବ୍ରାଣ୍ଡଷ୍ଟାଡଟର୍ ଏବଂ ମେଲାର୍ଡ, 2019)। ନଚ୍ ସିଗନାଲିଂ ପଥ ମାନବ ସ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣରେ ଜଡିତ ବୋଲି ଜଣାଯାଏ। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ କ୍ରିପ୍ଟୋ-1ର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ନକଆଉଟ୍ କର୍କଟ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍କୁ ଦମନ କରେ। ତେଣୁ, କ୍ରିପ୍ଟୋ-1 TNBC ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିକିତ୍ସା ଲକ୍ଷ୍ୟ ହୋଇପାରେ (କାଷ୍ଟ୍ରୋ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2015)।
XCL12 ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଏହାର କେମୋକାଇନ୍ ରିସେପ୍ଟର CXC (CXCR4 ଏବଂ CXCR7) କର୍କଟ କୋଷ ପ୍ରସାର, ବୃଦ୍ଧି, ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଏବଂ ଆକ୍ରମଣରେ ବିଭିନ୍ନ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତି (Wu et al., 2015)। ଏହି କେମୋରେସେପ୍ଟରଗୁଡ଼ିକୁ ଭିଭୋ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ମଡେଲ (Wu et al., 2015) ଉଭୟରେ ଏକାଧିକ ସଙ୍କେତିକ ପଥ ମାଧ୍ୟମରେ TNBC ର ବିକାଶ ସହିତ ଜଡିତ କରାଯାଇଛି। ଏହା ସହିତ, CXCR4 ଏବଂ CXCR7 ର ସକ୍ରିୟକରଣ TNBC ରେ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ପ୍ରତି ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ଖରାପ ପୂର୍ବାନୁମାନ ସହିତ ଜଡିତ (Karn et al., 2022)। ତେଣୁ, CXCR4 ଏବଂ CXCR7 ର ନକଆଉଟ୍ TNBC ସମେତ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଔଷଧ ଟାର୍ଗେଟ ଜିନ୍ ହୋଇପାରେ। Yang et al. ଦ୍ୱାରା ଅଧ୍ୟୟନ। Yang et al (2019) CXCR4 ଏବଂ CXCR7 ଜିନ୍ କୁ ସହ-ନକ୍ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ ଏବଂ ଜାଣିପାରିଲେ ଯେ TNBC ପ୍ରସାର, ବୃଦ୍ଧି, ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଏବଂ ଆକ୍ରମଣ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା (Yang et al., 2019)।
ସ୍ତନ କର୍କଟ ଟିସୁରେ TNBC ଅନ୍କୋଜିନ୍ miR-3662 ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ସ୍ତର ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଛି (Yi et al., 2022)। miR-3662 ର ନକଡାଉନ୍ ସ୍ତନ କର୍କଟ ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଉଭୟ ଭିଭୋ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋରେ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରେ ବୋଲି ଦେଖାଯାଇଛି (ଅଗରୱାଲ ଏବଂ ଗୁପ୍ତା, 2021)। HBP-1 ହେଉଛି Wnt/-କ୍ୟାଟେନିନ୍ ସିଗନାଲିଂର ଏକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ପ୍ରତିରୋଧକ ଏବଂ TNBC କୋଷଗୁଡ଼ିକର miR-3662-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଏହା ଦାୟୀ। ସମ୍ପ୍ରତି, Yi et al. ଜାଣିପାରିଲେ ଯେ miR-3662-HBP1 ଅକ୍ଷ TNBC କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ Wnt/-କ୍ୟାଟେନିନ୍ ସିଗନାଲିଂ ପଥକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ (Yi et al., 2022)। ଏହାର ଟ୍ୟୁମର-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରକାଶନ ଯୋଗୁଁ, miR-3662 TNBC ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଚିକିତ୍ସା ଲକ୍ଷ୍ୟ ହୋଇପାରେ। ତେଣୁ, TNBC ର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ନୂତନ ଔଷଧ ବିକାଶ ପାଇଁ miR-3662 ର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ନକଡାଉନ୍ ଏକ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ପଦ୍ଧତି ହୋଇପାରେ।
UBR5 ହେଉଛି ଏକ 300 kDa ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଫସଫୋପ୍ରୋଟିନ ଯାହାକୁ ବିଭିନ୍ନ କର୍କଟ ରୋଗରେ ଟ୍ୟୁମରିଜେନେସିସ୍, ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଏବଂ ଇମ୍ୟୁନିଟି ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଏକ ପ୍ରମୁଖ ନିୟାମକ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023)। UBR5 କୁ TNBC ନମୁନାରେ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଉଚ୍ଚମାନର ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ଏହାର ubiquitin ligase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରସାରକୁ ପ୍ରେରଣା ଦେଇ ERα କାର୍ଯ୍ୟକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିଥାଏ (Bolt et al., 2015)। ପ୍ରାଥମିକ TNBC ନମୁନାର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଏକ୍ସୋମ୍ ସିକୋଇନ୍ସିଂ ଅଧ୍ୟୟନ ମଧ୍ୟ UBR5 ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରକାଶନ ଦେଖାଇଛି, ଯାହା TNBC ର ବିକାଶରେ ଏହାର ଭୂମିକା ସୂଚାଇଥାଏ। ଏହା ସହିତ, UBR5 ର CRISPR/Cas9-ଚାଳିତ ବିଲୋପ TNBC ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିରୋଧ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ମାଉସ୍ ମଡେଲରେ ବୃଦ୍ଧି ଦେଖାଇଛି। ଅଧିକନ୍ତୁ, ଏକ ଜଙ୍ଗଲୀ-ପ୍ରକାର ମାଉସ୍ ମଡେଲରେ UBR5 ର ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତି ଏହାର ପୂର୍ଣ୍ଣ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ପୁନଃସ୍ଥାପିତ କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଏହି ପ୍ରଭାବ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଷ୍ଟ୍ରେନରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇନଥିଲା (Liao et al., 2017)। UBR5 ର ଅଭାବ ଦୁର୍ବଳ ଆଞ୍ଜିଓଜେନେସିସ୍ ହେତୁ TNBC ରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍, ନେକ୍ରୋସିସ୍ ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେବା ସହିତ ଜଡିତ। UBR5 ର କ୍ଷତି ଯୋଗୁଁ, ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ଅଙ୍ଗଗୁଡ଼ିକୁ ଟ୍ୟୁମର ପ୍ରସାରଣ ହ୍ରାସ ପାଏ, ଏବଂ UBR5 ମୁଖ୍ୟତଃ E-କ୍ୟାଡେରିନ୍ ପ୍ରକାଶନକୁ ହ୍ରାସ କରି ଅସ୍ୱାଭାବିକ EMT ପ୍ରେରଣା ଦିଏ (ଝାଙ୍ଗ ଏବଂ ୱେନବର୍ଗ, 2018)। ସମ୍ପ୍ରତି, E3 ubiquitination କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର ଅଭାବ ହେତୁ TNBC ରେ UBR5 IFN-γ-ପ୍ରେରିତ PDL1 ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନରେ ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରକ ଭାବରେ ଦେଖାଯାଇଥିଲା। RNA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟୋମ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ UBR5 IFN-γ ପଥ ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍ ଉପରେ ସିଷ୍ଟମିକ୍ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ RNA (PKR) ଏବଂ ଏହାର ସିଗନାଲ ଟ୍ରାନ୍ସଡ୍ୟୁସର୍ ଏବଂ ଆକ୍ଟିଭେଟରଗୁଡ଼ିକର ସକ୍ରିୟକରଣ ସ୍ତର ବୃଦ୍ଧି କରି PDL1 ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିପାରେ। ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ 1 (STAT1) ଏବଂ ଇଣ୍ଟରଫେରନ୍ ନିୟାମକ କାରକ 1 (IRF1)। ତଥାପି, UBR5 ଏବଂ PD-L1 ପ୍ରକାଶନର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତାଯୁକ୍ତ ମିଳିତ ଆବଲେଶନ୍ କେବଳ ଅବରୋଧ ଅପେକ୍ଷା ଏକ ସହକାର୍ଯ୍ୟଶୀଳ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ, ଯାହାର ଟ୍ୟୁମର ସୂକ୍ଷ୍ମ ପରିବେଶ ଉପରେ ଗଭୀର ପ୍ରଭାବ ପଡ଼େ (Wu et al., 2022)। ତେଣୁ, CRISPR/Cas9 UBR5 କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବାଧା ଦେବା ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉପକରଣ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା TNBC ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧିକୁ ଦମନ କରିଥାଏ।
ROR1 ହେଉଛି ଏକ ପ୍ରକାର I ଟ୍ରାନ୍ସମେମ୍ବ୍ରେନ ପ୍ରୋଟିନ ଯାହା କର୍କଟ ଏବଂ ଭ୍ରୁଣ ବିକାଶ ସମୟରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୁଏ ଏବଂ ଏହାକୁ ଏକ ଅନ୍କୋଫେଟାଲ୍ ପ୍ରୋଟିନ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି (ନିକୋଲାସ୍ ବୋର୍ଚେର୍ଡିଂ, 2014)। ବିଭିନ୍ନ ମାନବ କର୍କଟ ରୋଗର ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ଆଚରଣ ROR1 ର ଉପନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସହିତ ଜଡିତ। ROR1 କୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରି ଚିକିତ୍ସା ସମ୍ବଳିତ ଇନ ଭିଭୋ ଏବଂ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିବଦ୍ଧ ଫଳାଫଳ ମିଳିଛି (Chien et al., 2016)। ସ୍ତନ ଟିସୁ ବାୟୋପ୍ସିରେ ROR1 mRNA ର ଉଚ୍ଚ ସ୍ତର ମଧ୍ୟ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ବେସାଲ୍-ପରି ସ୍ତନ (BL) ଟ୍ୟୁମର ଏବଂ ଶରୀରର ଅନ୍ୟ ଅଂଶକୁ ସେମାନଙ୍କର ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣ ସହିତ ଜଡିତ ହୋଇଛି। ଅଧିକନ୍ତୁ, ROR1 ର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶନକୁ TNBC ର ବିକାଶ ପାଇଁ ଏକ ପୂର୍ବାନୁମାନ ମାର୍କର ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି (Chien et al., 2016)। ତଥାପି, TNBC ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ROR1 କୁ ନୀରବ କରିବା ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ରଣନୀତି ହେବ।
ସିଆଲିଲେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଗ୍ଲାଇକୋକଞ୍ଜୁଗେଟ୍ସରେ ସିଆଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଯୋଡାଯାଏ, ଯାହା ସିଆଲିଲ୍ଟ୍ରାନ୍ସଫେରେଜ୍ (STs) ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ପନ୍ନ ହୁଏ। ST8SIA1 ST ପରିବାରର ଏବଂ ଲିମ୍ଫୋସାଇଟିକ୍ ଲ୍ୟୁକେମିଆ ଏବଂ କୋଲୋରେକ୍ଟଲ୍ କର୍କଟ ଭଳି ବିଭିନ୍ନ ରୋଗର ରୋଗଜନିତତାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ (ଚାଙ୍ଗ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2018)। RNA କ୍ରମ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ST8SIA1 TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ସ୍ତନ ଟିସୁରେ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରକାଶିତ ହୁଏ ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ଜିନ୍ p53 ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ସକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ସହଭାଗୀ, ଯାହା TNBC ର ରୋଗଜନିତତାରେ ଅବଦାନ ରଖିପାରେ (ବାଟୁଲା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2017)। ଏହା ସହିତ, ST8SIA1 TNBC ର ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତିରେ ଜଡିତ, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଏହା TNBC ର ଘଟନା ଏବଂ ବିକାଶରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। TNBC ର ଏକ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ମଡେଲରେ, CRIPSR/Cas9 ଦ୍ୱାରା ST8SIA1 ର ନକ୍ ଡାଉନ୍ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ କୁ ଅବରୋଧ କରିବା ପାଇଁ ଦେଖାଯାଇଥିଲା (ବାଟୁଲା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2017)। ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ TNBC ଚିକିତ୍ସାରେ ST8SIA1 ଅନ୍କୋଜିନର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ନିରୋଧ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉପକରଣ ହୋଇପାରେ।
NAT1 ହେଉଛି ଏକ ମେଟାବୋଲିକ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଯାହା ପର୍ଯ୍ୟାୟ II ଜେନୋବାୟୋଟିକ୍ ଯୌଗିକ ଗଠନକୁ ଉତ୍ପ୍ରେରକ କରିଥାଏ ଏବଂ ପ୍ରାୟ ସମସ୍ତ ମାନବ ଟିସୁରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥାଏ। ସୁଗନ୍ଧିତ ଆମାଇନ୍ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014) ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ମଧ୍ୟ NAT1 ଆସେଟିଲ୍-CoA (ଆସେଟିଲ୍-CoA) କୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା ପାଇଁ କୋଫ୍ୟାକ୍ଟର ଫୋଲେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିପାରେ। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ NAT1 ସ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷ ମଡେଲରେ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ମେଟାଲୋପ୍ରୋଟିନେଜ୍ 9 (MMP9) କାର୍ଯ୍ୟକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ଏବଂ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଅନାହାର ସମୟରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତି (ROS) ବିରୁଦ୍ଧରେ ସୁରକ୍ଷା ଦିଏ (Wang et al., 2018)। NAT1 ର ବିଲୋପ ପାଇରୁଭେଟ୍ ଡିହାଇଡ୍ରୋଜେନେଜ୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସକୁ ବାଧା ଦେବା ଦେଖାଯାଇଛି, ଯାହା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଡିସଫଙ୍କସନ୍ (Wang L. et al., 2019) ଆଡ଼କୁ ନେଇଥାଏ। ଏହା ସହିତ, ବିଭିନ୍ନ ଅନ୍ୟ ରିପୋର୍ଟରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଛୋଟ ଅଣୁ ଏବଂ siRNA ସାଇଲେନ୍ସିଂ ବ୍ୟବହାର କରି NAT1 ନିରୋଧ ସ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷର ଆକ୍ରମଣ ଏବଂ ପ୍ରସାରକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ (Stepp et al., 2018)। ସମ୍ପ୍ରତି, ସ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷ ରେଖା MDA-MB-231 ରେ NAT1 କୁ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ଏହାର ପ୍ରକାଶନ ସ୍ତର ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି କୋଷୀୟ ମେଟାବୋଲିଜିମକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥିଲା। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଏହା ମଧ୍ୟ ଜଣାପଡିଛି ଯେ NAT-1 TNBC ର ଅଗ୍ରଗତି ଏବଂ ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (କାର୍ଲିସଲ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2020)।
ଅଙ୍କୋଜିନର ସମନ୍ୱିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ ସୁପର ଏନହାନ୍ସର୍ସ, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ ଫ୍ୟାକ୍ଟର ଏବଂ ସହକାରକ (Hnisz et al., 2015) ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୁଏ। ଏହା ସହିତ, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, ଏବଂ CDK13 ପରି ସାଇକ୍ଲିନ୍-ନିର୍ଭରଶୀଳ କାନାସେସ୍ (CDKs) ର ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଆବଶ୍ୟକ। ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ, CDK7 RNA ପଲିମରେଜ୍ II ର ଫସଫୋରାଇଲେସନ୍ ରେ ସାମିଲ, ଯାହା TNBC ର ପାଥୋଜେନେସିସ୍ ରେ ଅଙ୍କୋଜିନ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନର ଆରମ୍ଭ ଏବଂ ପ୍ରସାର ପାଇଁ ବହୁତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ଏକ ମୁଖ୍ୟ ଅଧ୍ୟୟନରେ, CRISPR/Cas9 ଦ୍ୱାରା CDK7 ର ବିଲୋପ TNBC କୁ ବାଧା ଦେଇଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ TNBC ର ପାଥୋଜେନେସିସ୍ CDK7 ଉପରେ ନିର୍ଭରଶୀଳ (ୱାଙ୍ଗ Y. et al., 2015)।
ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ MYC ଏବଂ RBP (RNA ବାଇଣ୍ଡିଂ ପ୍ରୋଟିନ୍)ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ, ଯେତେବେଳେ MYC କିମ୍ବା RBPରେ ଏକକ ଜିନ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷର ବୃଦ୍ଧିକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ନାହିଁ (ଆଇନଷ୍ଟାଇନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। ମାନବ ଜିନୋମର 1000 ରୁ ଅଧିକ RBP ଗୁଡିକୁ CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ ଲାଇବ୍ରେରୀ ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍କ୍ରିନିଂ କରାଯାଇଛି। ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ, 57 RBP ଗୁଡିକୁ ଅତ୍ୟଧିକ ଉଚ୍ଚ MYC ସ୍ତର ସହିତ କର୍କଟ କୋଷର ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ଜଣାପଡିଛି (ହ୍ୱିଲର ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020)। ଏହା ସହିତ, YTHDF2 TNBC କୋଷର ବୃଦ୍ଧି ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ଅଧିକ MYC ପ୍ରକାଶନ ସହିତ କର୍କଟ କୋଷରେ ଉଚ୍ଚ-ସ୍ତରୀୟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ ଅନୁବାଦ ସମୟରେ ମିଥାଇଲେଟେଡ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରେ। ଏହା ସହିତ, YTHDF2 କର୍କଟ କୋଷ ପାଇଁ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ନୁହେଁ, ଯାହା TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ବଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ MYC ସ୍ତର ଉପରେ କମ୍ ନିର୍ଭରଶୀଳ (ଆଇନଷ୍ଟାଇନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021), ଯାହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଏହା TNBC କୁ ପରାସ୍ତ କରିପାରିବ ଏପରି ଔଷଧ ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଚିକିତ୍ସା ଲକ୍ଷ୍ୟ ହୋଇପାରେ।
ଜିଙ୍କ ଫିଙ୍ଗର ପ୍ରୋଟିନ୍ (ZNFs) ମୋଟ ମାନବ ଜିନୋମର ପ୍ରାୟ 1% ଅଟେ। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ZNF ବିଭିନ୍ନ କର୍କଟ ରୋଗରେ କୋଷ ପ୍ରସାରକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିବ, ଯେପରିକି ଯକୃତ କର୍କଟ, ସ୍ତନ କର୍କଟ ଏବଂ କୋଲୋରେକ୍ଟଲ୍ କର୍କଟ (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017)। CRISPR ନକଆଉଟ୍ ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଲାଇବ୍ରେରୀଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷରେ ବିଭିନ୍ନ ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ଜିନ୍ (TSGs) ସ୍କ୍ରିନ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି (Shalem et al., 2014)। ସେବେଠାରୁ, CRISPR/Cas9 ZNF319-ଡିଲିଟ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ତନ କର୍କଟ କୋଷର ଏକ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମିକ୍ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ZNF319 ହେଉଛି ଏକ ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ଜିନ୍ ଯାହା ସ୍ତନ କର୍କଟ ପ୍ରସାରକୁ ହ୍ରାସ କରେ ଏବଂ ତେଣୁ ବିଭିନ୍ନ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ସଙ୍କେତିକ ଯନ୍ତ୍ର ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜୈବିକ କାର୍ଯ୍ୟରେ ସାମିଲ ହୁଏ (Wang L. et al., 2022)।
ଫେରୋପ୍ଟୋସିସ୍ ହେଉଛି ଏକ ପ୍ରକାରର ପ୍ରୋଗ୍ରାମଡ୍ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ଯାହା ଲୁହାର ଉପସ୍ଥିତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ। ଏହା ଜଣାଯାଏ ଯେ ଫେରୋପ୍ଟୋସିସ୍ ର ବିକାଶ ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସାଇଡ୍ ର ଉପସ୍ଥିତି ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୁଏ। ଏହା ସହିତ, PKCβII ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେସନ୍ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁଥିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେସନ୍ ଫେରୋପ୍ଟୋସିସ୍ ସହିତ ଜଡିତ। CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥ କାଇନେଜ୍ ଇନହିବିଟରଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଲାଇବ୍ରେରୀ ସ୍କ୍ରିନିଂରୁ ଜଣାପଡ଼ିଛି ଯେ PKCβII ଲିପିଡ୍ ପେରୋକ୍ସିଡେସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ସାମିଲ, ଯାହା MDA-MB-231 କୋଷରେ ଫେରୋପ୍ଟୋସିସ୍ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (ଜାଙ୍ଗ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2022)। ତେଣୁ, ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ CRISPR/Cas9 ଦ୍ୱାରା PKCβII ର ନକଆଉଟ୍ ଫେରୋପ୍ଟୋସିସ୍-ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ରୋଗର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଟ୍ୟୁମର ଦମନକାରୀ ଜିନ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟ ହୋଇପାରେ (ଜାଙ୍ଗ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2022)।
କର୍କଟ ରୋଗୀଙ୍କ ମୃତ୍ୟୁର ପ୍ରାୟ 90% ପାଇଁ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ଦାୟୀ ବୋଲି ବିଶ୍ୱାସ କରାଯାଏ ଏବଂ ଏହା କର୍କଟ ଚିକିତ୍ସାରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ (ବୁକୋସ୍କି ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2020)। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଔଷଧ ପ୍ରବାହ, DNA ମରାମତି, ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ କୋଷ ସଙ୍କେତ ପଥ ସହିତ ଜଡିତ ଯଥେଷ୍ଟ ସଂଖ୍ୟକ ଜିନ୍ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ସହିତ ଜଡିତ (ହାଇଦର ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2020)। ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ, CRISPR/Cas9 ଉପକରଣ ଦ୍ୱାରା ଅନେକ ଜିନ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ଏବଂ କର୍କଟ-ବିରୋଧୀ ଚିକିତ୍ସାର ପ୍ରଭାବ ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ଫଳାଫଳ ଦେଖାଇଛି (ଭାଘାରି-ତାବାରି ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2022)। ଏହା ସହିତ, ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୁପୁଟ୍ CRISPR/Cas9 ଜିନ୍ ନକଆଉଟ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଲାଇବ୍ରେରୀଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ଜିନ୍ ଲକ୍ଷ୍ୟର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାରେ ଜଡିତ କରାଯାଇଛି (ଶାଲେମ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2015)। ପାକ୍ଲିଟାକ୍ସେଲ ପ୍ରତିରୋଧ ଜିନ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ, ଜିନୋମ୍-ୱାଇଡ୍ sgRNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ସ୍କ୍ରିନିଂ ସହିତ RNA ସିକୋଇନ୍ସିଂ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇ ଆଠଟି ପ୍ରାର୍ଥୀ ଜିନ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା, ଯେଉଁଥିରେ ହିଷ୍ଟୋନ୍ ଡିଆସିଟିଲେଜ୍ 9 (HDAC9) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା ପୁନଃବାର TNBC (B et al., 2020) ଥିବା ରୋଗୀଙ୍କଠାରେ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ସହିତ ଜଡିତ। ଅନ୍ୟ ଏକ ଅଧ୍ୟୟନରେ, କ୍ୟାନସର ବିରୋଧୀ ଔଷଧ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ବଞ୍ଚିବା ସମୟରେ ଡିସେରିନ୍/ଥ୍ରେଓନାଇନ୍ ଏବଂ ଟାଇରୋସାଇନ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ କାଇନେଜ୍ (DSTYK) ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରକାଶନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା। ଅଧିକନ୍ତୁ, DSTYK ର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ନକଡାଉନ୍ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ (SUM102PT କୋଷ ଏବଂ MDA-MB-468 କୋଷ) ଏବଂ ଏକ ଇନ୍ ଭିଭୋ TNBC ମଡେଲ୍ (Ogbu et al., 2021) ର ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା।
ଯଦିଓ TNBC ର MAPK ପାଥୱେର ଅସ୍ୱାଭାବିକ ସକ୍ରିୟକରଣ ଅଛି, MEK-ଲକ୍ଷ୍ୟଯୁକ୍ତ ଚିକିତ୍ସାର କ୍ଲିନିକାଲ୍ ପ୍ରଭାବ ଦୁର୍ବଳ। ଏକ CRISPR/Cas9 ଜିନୋମିକ୍ ଲାଇବ୍ରେରୀ ସ୍କ୍ରିନ୍ ପ୍ରକାଶ କରିଛି ଯେ PSMG2 (ପ୍ରୋଟିଓମ୍ ଆସେମ୍ବଲି ଚାପେରୋନ୍ 2) ର ନିରୋଧ TNBC BT549 ଏବଂ MB468 କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ MEK ଇନହିବିଟର AZD6244 ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳ କରିଥାଏ। PSMG2 ର CRISPR/Cas9 ନକ୍ ଡାଉନ୍ ସାଧାରଣ ପ୍ରୋଟିଜୋମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥିଲା, ଯାହା PDPK1 ର ଅଟୋଫାଜି-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ବିଚ୍ଛିନ୍ନକରଣକୁ ନେଇଥିଲା, ଯାହାଦ୍ୱାରା AZD6244 (MEK ଇନହିବିଟର) ଏବଂ MG132 (ପ୍ରୋଟିଜୋମ୍ ଇନହିବିଟର) ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ TNBC ମାଉସ୍ ମଡେଲରେ ଟ୍ୟୁମର କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଆହୁରି ଉନ୍ନତ କରିଥିଲା। ତେଣୁ, ଟ୍ୟୁମର କୋଷ ପ୍ରସାରକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରୋଟିଜୋମ୍ ଏବଂ MAP କାଇନେଜ୍ (MEK) ଇନହିବିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ସମନ୍ୱୟମୂଳକ ଭାବରେ ପ୍ରଶାସିତ କରାଯାଇପାରିବ (ୱାଙ୍ଗ୍ X. ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2022)।
TNBC ପ୍ରତିରୋଧ ପାଇଁ ଜିନ୍ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର କ୍ଷତି ପାଇଁ ସ୍କ୍ରିନ୍ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି (Shu et al., 2020)। Ge et al TNBC ରେ JQ1, ଏକ BET ବ୍ରୋମୋଡୋମାଇନ୍ ଇନହିବିଟର (BBDI) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିବା କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧର କ୍ରିୟାବିଧି ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିଥିଲେ। CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି, ସେମାନେ ଜାଣିପାରିଲେ ଯେ rb1 ଜିନ୍ ଡିଲିଟ୍ କରିବା ଦ୍ୱାରା TNBC କର୍କଟ-ବିରୋଧୀ ଔଷଧ JQ1 ପ୍ରତି ପ୍ରତିରୋଧୀ ହୋଇଯାଏ। ତେଣୁ, TNBC ରେ JQ1 ଔଷଧର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ rb1 କାର୍ଯ୍ୟ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ସେମାନେ ଏହା ମଧ୍ୟ ରିପୋର୍ଟ କରିଛନ୍ତି ଯେ ପାକ୍ଲିଟାକ୍ସେଲ ହେଉଛି ଏକ CDK4/6 କାଇନେଜ୍/ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବ୍ୟୁଲ୍ ଇନହିବିଟର, ଏବଂ JQ1 ପରି BBDI ସହିତ ଏହାର ମିଶ୍ରଣ ଔଷଧ-ପ୍ରତିରୋଧୀ TNBC ପ୍ରତି ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିକିତ୍ସାମୂଳକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଦାନ କରିପାରେ (Ge et al., 2020)।
TNBC ରେ ନିଓଆଡଜୁଭାଣ୍ଟ ଚିକିତ୍ସା ପ୍ରତି ପ୍ରତିରୋଧ ପାଇଁ ଲମ୍ବା ନନକୋଡିଂ RNA (lncRNA) ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ଭୂଦୃଶ୍ୟ ଦାୟୀ ବୋଲି ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ TNBC ରେ ପାଞ୍ଚଟି ଭିନ୍ନ MALAT1 lncRNA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଛି। ଏହା ସହିତ, MALAT1 ର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ବିଲୋପ TNBC BT-549 କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପାକ୍ଲିଟାକ୍ସେଲ୍ ଏବଂ ଡକ୍ସୋରୁବିସିନ୍ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା, ଯାହା TNBC ରେ MALAT1 ପ୍ରତିରୋଧ ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭୂମିକା ସୂଚାଇଥିଲା (Shaath et al., 2021)।
BRCA1 (BRCA1m) ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ବିବିଧ ଏବଂ ତେଣୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା କଷ୍ଟକର। BRCA1 ର କୃତ୍ରିମ ଘାତକ ଅଂଶୀଦାର PARP1 (ପଲି(ADP-ରାଇବୋସ୍) ପଲିମରେଜ୍ କୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା ଦ୍ୱାରା TNBC ଔଷଧ କେମୋସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରେ। CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି, PARP1 କୁ ବିଲୋପ କରିବା ଦ୍ୱାରା ଡକ୍ସୋରୁବିସିନ୍, ଜେମ୍ସିଟାବାଇନ୍ ଏବଂ ଡୋସେଟାକ୍ସେଲ୍ ଭଳି କର୍କଟ ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧକ ଔଷଧର mBRCA1 ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ TNBC କୋଷ ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ PARP1 ମଧ୍ୟ TNBC ରେ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧରେ ସାମିଲ ଅଛି (Vaghari-Tabari et al., 2022)। । ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ଜିନ୍ BRCA1 କିମ୍ବା BRCA2 ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଲୋକଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ସ୍ତନ କର୍କଟ ହେବାର ସମ୍ଭାବନାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ ବୋଲି ଜଣାଯାଏ। ଏହି ରୋଗୀଙ୍କ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ PARP ଇନହିବିଟର ବ୍ୟବହାର ଆବଶ୍ୟକ। ଏହା ସହିତ, ଏହା ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୋଇଛି ଯେ CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ସାଲଭେଜ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର DNPH1 କୁ ନକଆଉଟ୍ କରିବା ଦ୍ଵାରା ବିଷାକ୍ତ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ 5-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସିମିଥାଇଲଡିଅକ୍ସ୍ୟୁରିଡିନ୍ (hmdU) ମନୋଫସଫେଟ୍ ଦୂର ହୋଇପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା PARP ଇନହିବିଟର (Fugger) ପ୍ରତି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ପ୍ରତି BRCA-ଅଭାବ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବୃଦ୍ଧି ପାଇବ। ଏହିପରି, CRISPR/Cas9 ଏବଂ PARP1 ଇନହିବିଟର TNBC ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିକିତ୍ସା ରଣନୀତି ହୋଇପାରନ୍ତି।
ପେନିଟ୍ରାଣ୍ଟ ଗ୍ଲାଇକୋପ୍ରୋଟିନ୍ (P-gp) ଜିନ୍ ହେଉଛି ଏକ ବହୁ-ଦ୍ରବ୍ୟ ପ୍ରତିରୋଧୀ ଜିନ୍ ଯାହା ସାଧାରଣତଃ ସମସ୍ତ TNBC ର ପ୍ରାୟ 41% ରେ ଉପନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ (ସନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020)। P-gp-ପ୍ରେରିତ ଔଷଧ ପ୍ରବାହକୁ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗରେ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧର ଏକ ପ୍ରମୁଖ ନିୟାମକ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି। P-gp ଇନହିବିଟରମାନେ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗରେ ଆଣ୍ଟିକ୍ୟାନ୍ସର ଔଷଧ ପ୍ରତି ବର୍ଦ୍ଧିତ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଛନ୍ତି (ଫାମ୍ଟା ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। ତେଣୁ, TNBC ରେ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ଆବଲେସନ୍ କିମ୍ବା P-gp ଏବଂ P-gp ଇନହିବିଟର ଦମନ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପଦ୍ଧତି ହୋଇପାରେ।
ATP-ବାଇଣ୍ଡିଂ କ୍ୟାସେଟ୍ ଟ୍ରାନ୍ସପୋର୍ଟର G2 (ABCG2) TNBC ରେ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ସୃଷ୍ଟି କରେ ବୋଲି ଜଣାଶୁଣା (Palasuberniam et al., 2015), ଯଦିଓ CRISPR/Cas9 ଏବଂ ABCG2 ସାଇଲେନ୍ସିଂ ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ଜିନ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟକରଣ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ଉପରେ ବର୍ତ୍ତମାନ କୌଣସି ରିପୋର୍ଟ ନାହିଁ। PTEN ABCG2 ସକ୍ରିୟକରଣକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରେ (Palasuberniam et al., 2015), (ଦୀପକ ସିଂହ et al., 2021)। ତେଣୁ, ABCG2 କୁ ଅପସାରଣ କରିବା ପାଇଁ CRISP/Ca9 ବ୍ୟବହାର କରିବା ଏବଂ ଏହାକୁ ABCG2 ଇନହିବିଟର ସହିତ ମିଶ୍ରଣ କରିବା TNBC ରେ ଔଷଧ ପ୍ରତିରୋଧକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ଚିକିତ୍ସା ହୋଇପାରେ। ସାରଣୀ 2 ରେ CRISPR/Cas9 ସମସ୍ତ ପ୍ରତିରୋଧ ଜିନ୍ କୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରି ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଛି।
ସାରଣୀ 2. CRISPR/Cas9 କର୍କଟ ରୋଗ ପ୍ରତି କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ କରିବା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ TNBC ପ୍ରତିରୋଧ ଜିନ୍କୁ ଟାର୍ଗେଟ କରେ।
CRISPR/Cas9 ଲାଇବ୍ରେରୀଗୁଡ଼ିକ କର୍କଟ ରୋଗଜନିତତା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଉପକରଣ (ଚାନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2022)। ଏହି ସ୍କ୍ରିନିଂ ପଦ୍ଧତିରେ ଚାରୋଟି ପଦକ୍ଷେପ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଯେପରିକି (କ) ଲାଇବ୍ରେରୀ ନିର୍ମାଣ, (ଖ) ଲେଣ୍ଟିଭାଇରାଲ୍ ଟ୍ରାନ୍ସଡକ୍ସନ୍, (ଗ) ଫେନୋଟାଇପିକ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ, ଏବଂ (ଘ) ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ। ଯଦିଓ TNBC ର MAPK ପାଥୱେର ଅସ୍ୱାଭାବିକ ସକ୍ରିୟକରଣ ଅଛି, ତଥାପି PTEN, RB1, ଏବଂ TP53 ଭଳି ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର୍ ଜିନ୍ ରେ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ବହନ କରୁଥିବା TNBC ରୋଗୀଙ୍କ ପାଇଁ MEK ଟାର୍ଗେଟ୍ ଥେରାପିର କ୍ଲିନିକାଲ୍ ପୂର୍ବାନୁମାନ ବହୁତ ଖରାପ।
ଏହା ସହିତ, CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ଜିନ୍ ନକଆଉଟ୍ ସ୍କ୍ରିନ୍ MDA-MB-231 ଉପରେ ଡିହାଇଡ୍ରୋକାଟ୍ରୋଲର ପ୍ରଭାବ ବୁଝିବା ପାଇଁ ଗୁଆଟେମାଲାର ଫୁଲ ଏବଂ ପତ୍ର ନିର୍ଗମରେ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣରେ ଥିବା ସବୁଠାରୁ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଏବଂ ଚୟନିତ ଅଣୁ, ଡିହାଇଡ୍ରୋକାଟ୍ରୋଲ୍ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲା। ଚୟନିତ କୋଷ ସାଇଟୋଟକ୍ସିସିଟିର ଯନ୍ତ୍ରପାତି। TNBC ଉପପ୍ରକାରର ମେସେନକାଇମାଲ ଷ୍ଟେମନେସ୍ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ। ଏହି CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ ସ୍କ୍ରିନ୍ ଏହା ମଧ୍ୟ ପ୍ରକାଶ କରିଛି ଯେ HSD17B11, 17β-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସିଷ୍ଟେରଏଡ୍ ଡିହାଇଡ୍ରୋଜେନେଜ୍ ପ୍ରକାର 11 ଏନକୋଡିଂ କରୁଥିବା ଏକ ଜିନ୍, MDA-MB-231 କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରକାଶିତ ଏବଂ MDA-MB-231 କୋଷ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଡିହାଇଡ୍ରୋଫାଲକାରିନୋଲ୍ ରେ ପରିଣତ ହୁଏ (ଗ୍ରାଣ୍ଟ ଏଟ୍. ଅଲ୍., 2020)। ତେଣୁ, ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ CRISPR/Cas9 ଜିନୋମିକ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରାକୃତିକ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର କ୍ୟାନସର ବିରୋଧୀ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକର ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ବହୁତ ସମ୍ଭାବନା ଅଛି।
ଏହା ସହିତ, ଏକ ନିରପେକ୍ଷ ଜିନୋମ୍-ୱାଇଡ୍ ଇନ୍ ଭିଭୋ CRISPR/Cas9 ସ୍କ୍ରିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି କର୍କଟ ରୋଗ ପ୍ରତି TNBC ର ଦୁର୍ବଳତା ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ଅଙ୍କୋଜେନିକ୍ ଏବଂ ଟ୍ୟୁମର ସପ୍ରେସର ପାଥୱେ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ଲିଙ୍କ ଦେଖାଇଥିଲା। MTOR ଏବଂ Hippo ପାଥୱେର ମୁଖ୍ୟ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ TNBC ରେ ଟ୍ୟୁମର ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରୁଥିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି। ଏହା ସହିତ, ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ mTORC1/2 ଏବଂ YAP ଅଙ୍କୋପ୍ରୋଟିନର ଔଷଧୀୟ ନିରୋଧ ଏକ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ଡ୍ରଗ୍-ମାଟ୍ରିକ୍ସ ସିନର୍ଜି ମଡେଲ୍ ଏବଂ ଇନ ଭିଭୋ ରୋଗୀ-ପ୍ରାପ୍ତ ଜେନୋଗ୍ରାଫ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି TNBC ର ରୋଗଜନିତତାକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପ୍ରତିହତ କରେ। ଅଧିକନ୍ତୁ, ଟୋରିନ୍-1-ମଧ୍ୟସ୍ଥ mTORC1/2 ନିରୋଧ ମାକ୍ରୋପିନୋସାଇଟୋସିସ୍ ବୃଦ୍ଧି କରେ, ଯେତେବେଳେ ଭର୍ଟେପୋର୍ଫିନ୍-ପ୍ରେରିତ YAP ନିରୋଧ TNBC କୋଷ ମୃତ୍ୟୁକୁ ନେଇଥାଏ। ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ TNBC ପାଇଁ ନୂତନ ଏବଂ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଚିକିତ୍ସା ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଜିନୋମ୍-ୱାଇଡ୍ ଇନ୍ ଭିଭୋ CRISPR ସ୍କ୍ରିନିଂର ଶକ୍ତି ଏବଂ ଦୃଢ଼ତାକୁ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ କରିଥାଏ (ଡାଇ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2021)।
ଟ୍ୟୁମର୍ଜିନେସିସ୍ରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀର ଅନିୟମିତତା ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରଣ। କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଯନ୍ତ୍ରକୁ ବାଇପାସ୍ କରି ପ୍ରତିରକ୍ଷା କ୍ଲିୟରାନ୍ସକୁ ଏଡ଼ାଇ ଦିଅନ୍ତି, ଯେଉଁଥିରେ ଟ୍ୟୁମର୍ ସୂକ୍ଷ୍ମ ପରିବେଶରେ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ହସ୍ତକ୍ଷେପ ଏବଂ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀକୁ କ୍ଷତି ପହଞ୍ଚାଇବା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ତେଣୁ, ଏକ ଉନ୍ନତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀ ବିକାଶ କରିବା ଟ୍ୟୁମର୍ ସହିତ ଲଢ଼ିବା ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଉପାୟ ହୋଇପାରେ। CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ ଜିନ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନର ବ୍ୟବହାର ବିଭିନ୍ନ ଦୃଷ୍ଟିକୋଣରୁ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଅକ୍ଷମତା ସହିତ ଜଡିତ ଅନେକ ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରେ। ନିମ୍ନଲିଖିତ ପଥ ମାଧ୍ୟମରେ ସ୍ତନ କର୍କଟ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଆଣ୍ଟିଟ୍ୟୁମର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି (ଚିତ୍ର 3)।
ଚିତ୍ର 3. CRISPR/Cas9 ଇମ୍ୟୁନୋଥେରାପି TNBC କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରେ। CDK5 ର କ୍ଷତି ଏବଂ PDL1 ଏବଂ CD155 ର ନକଡାଉନ୍ ରୋଗ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ। ସେହିପରି, A2AR ର କ୍ଷତି ଏବଂ HER2, mucin 1 ଏବଂ TEM8 ପରି TAA ଗୁଡ଼ିକର ନକଡାଉନ୍ କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ହତ୍ୟା କରିବାରେ CAR-T କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଦକ୍ଷତା ବୃଦ୍ଧି କରିଛି। CRISPR/Cas9-ଚାଳିତ T କୋଷ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଦେଖାଇଛି ଯେ p38 କାଇନେଜର ବାଧା T କୋଷ ଆଣ୍ଟିଟ୍ୟୁମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ। CRISPR/Cas9 ଦ୍ୱାରା ସଂଶୋଧିତ T କୋଷଗୁଡ଼ିକ TCR (T କୋଷ ରିସେପ୍ଟର) ର ପ୍ରକାଶନକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ, ଯାହା ଫଳରେ T କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆଣ୍ଟିଟ୍ୟୁମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବୃଦ୍ଧି ପାଏ।
ଇମ୍ୟୁନୋଥେରାପିର ଲକ୍ଷ୍ୟ ହେଉଛି କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଆକ୍ରମଣ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଉତ୍ସାହିତ କରିବା। ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଚେକପଏଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶନ ସାଧାରଣତଃ ଅଟୋଇମ୍ମ୍ୟୁନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ରୋକିଥାଏ କିନ୍ତୁ କର୍କଟ ରୋଗକୁ ଏଡାଇବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରେ (ଟୋପାଲିଆନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2015)। ଏହି ପ୍ରୋଟିନ୍ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପୃଷ୍ଠରେ ଥିବା ରିସେପ୍ଟର ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୋଇ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ରୋକିଥାଏ। ଏକାଧିକ ଚେକପଏଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନ୍ (ଯେପରିକି CD155 ଏବଂ PD-L1) ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ PD-1 ରିସେପ୍ଟରକୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରିଥାଏ ଏବଂ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥାଏ, ବିଶେଷକରି TNBC (Li Y.-C. ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020)। CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି PD-L1 କିମ୍ବା ଏହାର ରିସେପ୍ଟରର ନକଡାଉନ୍ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀକୁ TNBC ଟ୍ୟୁମରକୁ ଆକ୍ରମଣ କରିବା ପାଇଁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିପାରେ (Yahata et ଅଲ୍., 2019)। ଏହା ସହିତ, CDK5 ର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ବିଲୋପ ମାଧ୍ୟମରେ PD-L1 ପ୍ରକାଶନର ନିମ୍ନନିୟନ୍ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ଏବଂ ଇନ୍ ଭିଭୋରେ ଟ୍ୟୁମର ବୃଦ୍ଧିକୁ ବାଧା ଦେବା ଦେଖାଯାଇଛି (ଡେଙ୍ଗ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2020)। ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗର ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ଏବଂ ଇନ୍ ଭିଭୋ ମଡେଲରେ ବୃଦ୍ଧି ନିରୋଧ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ shRNA-ମଧ୍ୟସ୍ଥତାରେ CD155 ହ୍ରାସ ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗ ଉପରେ ଏକ ଚିକିତ୍ସାମୂଳକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ (ଗାଓ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2018)।
CAR T କୋଷଗୁଡ଼ିକ CAR ପ୍ରକାଶ କରନ୍ତି ଯାହା ଟ୍ୟୁମର-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ (TAAs)କୁ ଚିହ୍ନିଥାଏ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଚେକପଏଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନ୍ର ନକ୍ଡାଉନ୍ ବ୍ୟବହାର କରିପାରେ (Li C. et al., 2020)। ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗରେ CAR T କୋଷ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରହିଛି, ଯେଉଁଥିରେ HER2, mucin1, ଏବଂ TEM8 (Bajgain et al., 2018) ଭଳି ଅନେକ TAA ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019) ବ୍ୟବହାର କରି PD-1କୁ ନକ୍ଆଉଟ୍ କରିବା ସମୟରେ ମେସୋଥେଲିନ୍ (TNBC BT-459 କୋଷରେ ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶିତ) କୁ ଟାର୍ଗେଟ କରୁଥିବା CAR T କୋଷଗୁଡ଼ିକ କର୍କଟ ରୋଗ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଅଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ବୋଲି ପ୍ରମାଣ ଅଛି। ତଥାପି, ରୋଗୀଙ୍କଠାରୁ T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବା ଏବଂ ତା’ପରେ ସେଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ୍ସ ଭିଭୋ ସମ୍ପାଦନ କରିବା ଏକ ଶ୍ରମ-ସଘନ ଏବଂ ସମୟ ସାପେକ୍ଷ ପ୍ରକ୍ରିୟା। ଯଦିଓ ସାର୍ବଜନୀନ T କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପୃଥକୀକରଣ ଆବଶ୍ୟକତାକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ, ଗ୍ରାଫ୍ଟ-ବନାମ୍ସ-ହୋଷ୍ଟ ଅସ୍ୱାଭାବିକତାକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଦାତା T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ମାନବ ଲ୍ୟୁକୋସାଇଟ୍ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ (HLA) ଶ୍ରେଣୀ I ଏବଂ T କୋଷ ରିସେପ୍ଟର (TCR) ପ୍ରକାଶ କରିବା ଉଚିତ (Ren et al., 2017)। , 2017a)। CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି, HDR ଏକକାଳୀନ TCR ଏବଂ HLA କୁ ଦୂର କରିପାରିବ ଏବଂ CAR ଏନକୋଡିଂ ଜିନ୍ କୁ ନଷ୍ଟ କରିପାରିବ। ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ CRISPR/Cas9 କୁ TCR ସ୍ଥାନ ମଧ୍ୟରେ ଆଣ୍ଟି-CD19 CAR ପ୍ରବେଶ କରାଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ହ୍ରାସ ନକରି ଦକ୍ଷତାର ସହିତ CAR ଉତ୍ପାଦନ କରାଯାଇପାରିବ (Dimitri et al., 2022)। TCR, ବିଟା-2-ମାଇକ୍ରୋଗ୍ଲୋବୁଲିନ୍ (B2M), HLA-I ସବୟୁନିଟ୍ ଏବଂ PD-1 ଏବଂ CTLA-4 ଭଳି ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ କୁ ଏକକାଳୀନ ଭାବରେ ଅପସାରଣ କରି ଆଲୋଜେନିକ୍ CAR T କୋଷ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ବିକଶିତ ହୋଇଛି, ଯାହା TNBC ବିରୁଦ୍ଧରେ ଅଧିକ କର୍କଟ-ବିରୋଧୀ ଗୁଣ ରଖିପାରେ (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022)।
CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରିବା ଦ୍ୱାରା CAR-T କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରଭାବଶାଳୀତା ଉନ୍ନତ ହୋଇପାରେ। ଆଡେନୋସିନ୍ର ଇମ୍ୟୁନୋସପ୍ରେସିଭ୍ ଗୁଣ ଅଛି ବୋଲି ଜଣାଯାଏ ଏବଂ ଏହା T କୋଷ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ଅବରୋଧ କରି ଏବଂ ଆଡେନୋସାଇନ୍ A2A ରିସେପ୍ଟର (A2AR)କୁ ସକ୍ରିୟ କରି କ୍ୟାନସର ପ୍ରତିରୋଧକ ଶକ୍ତି ହ୍ରାସ କରିପାରେ (ଭିଗାନୋ ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2019)। CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି A2AR କୁ ନୀରବ କରିବା ଦ୍ୱାରା ଭିଭୋରେ CAR-T କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରଭାବଶାଳୀତାରେ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଉନ୍ନତି ଘଟିଛି (Giuffrida ଏଟ୍ ଅଲ୍., 2021)। T କୋଷଗୁଡ଼ିକ ବିଭିନ୍ନ ଫେନୋଟାଇପିକ୍ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଯେପରିକି କୋଷିକା ପ୍ରସାରଣ, ଭିନ୍ନତା, ଅକ୍ସିଡେଟିଭ୍ ଚାପ ଏବଂ ଜିନୋମିକ୍ ଚାପ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବାକୁ ଜଣାଯାଏ। CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ T କୋଷ ସ୍କ୍ରିନିଂରେ 25ଟି ଭିନ୍ନ T କୋଷ ରିସେପ୍ଟର କାନାସେସର ବ୍ୟାଘାତ ଦେଖାଯାଇଥିଲା। ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ, p38 କିନାଜେସ୍ର ବିଲୋପ T କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆଣ୍ଟିଟ୍ୟୁମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଦେଖାଯାଇଛି, ଯାହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ p38 କିନାଜେସ୍ ହେଉଛି CAR-T କୋଷ ନିୟନ୍ତ୍ରଣର ଏକ ପ୍ରମୁଖ ନିୟାମକ (Gurusamy et al., 2020)।
CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଜେନେଟିକାଲ୍ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇପାରେ ଯାହା ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରକାଶିତ TCRs ଉତ୍ପାଦନ କରେ। ଜେନେଟିକାଲ୍ ଭାବରେ ସଂଶୋଧିତ T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ରୋଗୀଙ୍କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରିବା ଦ୍ୱାରା ଏଣ୍ଡୋଜେନ୍ସି T କୋଷଗୁଡ଼ିକ ତୁଳନାରେ ଅଧିକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ କ୍ୟାନସର ବିରୋଧୀ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦେଖାଯାଇଛି। ତେଣୁ, ଏଣ୍ଡୋଜେନ୍ସି TCRଗୁଡ଼ିକ ରୋଗୀଙ୍କଠାରେ ଜେନେଟିକାଲ୍ ଭାବରେ ପରିବର୍ତ୍ତିତ TCRଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ପ୍ରତିଯୋଗିତା କରିପାରେ, ଯାହା କର୍କଟ ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧକ ଚିକିତ୍ସାର ସମ୍ଭାବନାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ। ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ, CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ଗ୍ରହୀତା କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଏଣ୍ଡୋଜେନ୍ସି TCR-β ଅପସାରଣ କରିବା ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ କର୍କଟ ରୋଗୀଙ୍କୁ TCR-β T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରିବା ଦ୍ୱାରା ଏଣ୍ଡୋଜେନ୍ସି TCR ଯୌନ ପ୍ରତିଯୋଗିତାର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ଉନ୍ନତ କର୍କଟ ରୋଗ ପ୍ରତିରୋଧକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରାଯାଇପାରିବ (ଫ୍ୟାନ୍ ଏଟ୍ ଅଲ୍ 2018)। ତେଣୁ, CRISPR-ପରିବର୍ତ୍ତିତ T କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟତିକ୍ରମ କରିବା ସହିତ, TCRଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣ TCR-ପରିବର୍ତ୍ତିତ T କୋଷଗୁଡ଼ିକ ତୁଳନାରେ ଟ୍ୟୁମର ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ପ୍ରତି ହଜାର ଗୁଣ ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ। ଅତିରିକ୍ତ ଭାବରେ, ବିଭିନ୍ନ ଲ୍ୟୁକେମିଆରେ, γδ TCR+ CRISPR ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ପରିବର୍ତ୍ତିତ T କୋଷଗୁଡ଼ିକ ମାନକ TCR ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଅପେକ୍ଷା CD4+ ଏବଂ CD8+ T କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଅଧିକ ପ୍ରକାଶନ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରେ (Legut et al., 2018)। ତେଣୁ, CRISPR/Cas9 ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ସଂଶୋଧିତ T କୋଷଗୁଡ଼ିକ TNBC କୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଇମ୍ୟୁନୋଥେରାପି ପଦ୍ଧତି ହୋଇପାରେ।
ଇଣ୍ଟିଗ୍ରିନ୍ ହେଉଛି କୋଷ ଆଡେସନ୍ ଅଣୁ ଯାହା କୋଷିକା ଟ୍ରାନ୍ସମେମ୍ବ୍ରେନରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥାଏ ଏବଂ କୋଷିକାଗୁଡ଼ିକୁ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସ (ECM) ସହିତ ବାନ୍ଧିବାକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ (ହାମିଡି ଏବଂ ଇଭାସ୍କା, 2018)। ଇଣ୍ଟିଗ୍ରିନ୍ର ଅନିୟମିତତା ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରି କର୍କଟ ବିକାଶ ଏବଂ ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣ ସହିତ ଜଡିତ, ଯାହା ସଞ୍ଚାଳନରେ କର୍କଟ କୋଷ ବଞ୍ଚିବାର କାରଣ ହୁଏ (ହାମିଡି ଏବଂ ଇଭାସ୍କା, 2018)। CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥ ଇଣ୍ଟିଗ୍ରିନ୍ ନକ୍ ଡାଉନ୍ TNBC ରେ ଟ୍ୟୁମର ଅଗ୍ରଗତି, ମେଟାଷ୍ଟାସିସ୍ ଏବଂ ଉପନିବେଶକୁ ଧୀର କରିଥାଏ। ଇଣ୍ଟିଗ୍ରିନ୍ a5 (ITGA5) ର ନକ୍ ଡାଉନ୍ ଫୁସଫୁସ କର୍କଟ ଭଳି ଅନ୍ୟ କର୍କଟ ରୋଗରେ କୋଷ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଏବଂ ଅଗ୍ରଗତିକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି (ଜୁ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2017), ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଇଣ୍ଟିଗ୍ରିନ୍ a5 ମଧ୍ୟ TNBC ର ରୋଗଜନିତତାରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ କାରକ ହୋଇପାରେ।
ପାରମ୍ପରିକ ଭ୍ରୁଣ ଷ୍ଟେମ୍ (ES) କୋଷ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ନକଆଉଟ୍ ମୂଷା ସୃଷ୍ଟି କରିବା ଏକ ଶ୍ରମ-ସଘନ, ସମୟସାପେକ୍ଷ ଏବଂ ଅଦକ୍ଷ ପ୍ରକ୍ରିୟା। ହୋମୋଲୋଗସ୍ ପୁନଃସଂଯୋଗ ମାଧ୍ୟମରେ ES କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରିବା, କାଇମେରିକ୍ ମୂଷା ପ୍ରଜନନ କରିବା ଏବଂ ତା’ପରେ ହୋମୋଜାଇଗସ୍ ସନ୍ତାନ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ସେମାନଙ୍କୁ ହେଟେରୋଜାଇଗସ୍ ମୂଷା ସହିତ ପାର କରିବା ପାଇଁ ମାସ ଏବଂ ବର୍ଷ ସମୟ ଲାଗେ। ବହୁ ଜେନେଟିକ୍ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ସହିତ ମୂଷା ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ଜଟିଳ କ୍ରସ୍ ବ୍ରିଡିଂ ଆବଶ୍ୟକ। ତଥାପି, CRISPR/Cas9 ବ୍ୟବହାର କରି ES କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆବଲେସନ୍ ଦ୍ୱାରା କିମ୍ବା CRISPR/Cas9 ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକୁ ଏକକ-କୋଷ ନିଷେଧ ଅଣ୍ଡାରେ ମାଇକ୍ରୋଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ମୂଷା ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ଅନେକ ସମସ୍ୟା ଉପୁଜିଛି। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପରିବର୍ତ୍ତନର ପରିଚୟ ପ୍ରାୟତଃ ବାଇଆଲେଲିକ୍ ଲୋକିରେ ଘଟେ ଏବଂ ଏହା ଜିନ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନୁହେଁ। ସମ୍ପ୍ରତି ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା ଯେ CRISPR/Cas9 ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ବ୍ୟବହାର କରି ES କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଏକକାଳୀନ 5ଟି ଜିନ୍ (ନିଶିଜୋନୋ ଏଟ୍ ଅଲ୍, 2021) ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବାଇଆଲେଲିକ୍ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ପ୍ରବେଶ କରିପାରିବେ। ଏହି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ, Cas9 mRNA ଏବଂ ପାଞ୍ଚଟି ଜିନ୍-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ gRNA ଏକକାଳୀନ ES କୋଷରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାର ପ୍ରତିଶ୍ରୁତି ଏବଂ ପ୍ରଭାବକୁ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ କରିଥାଏ, ଯଦିଓ ଏହି ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକ ହୁଏତ ପ୍ରତିଷ୍ଠାତା ରେଖାଗୁଡ଼ିକୁ କ୍ୱିଣ୍ଟୁପଲ୍ ନକଆଉଟ୍ ମୂଷା ଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରଜନନ କରାଯିବା ସମୟରେ ପ୍ରଚଳିତ ହୋଇଥାଇପାରେ। ଅଧ୍ୟୟନ ଏକ ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଆବିଷ୍କାର ମଧ୍ୟ ରିପୋର୍ଟ କରେ: ଜେନେଟିକାଲି ପରିବର୍ତ୍ତିତ ମୂଷା ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ES କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଆଉ ଆବଶ୍ୟକ ନାହିଁ। ଏହା ବଦଳରେ, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜିନ୍ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକୁ ଅପସାରଣ କରିବା ପାଇଁ, Cas9 mRNA ଏବଂ gRNAକୁ ଏକକ-କୋଷ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଭ୍ରୁଣରେ ଇଞ୍ଜେକ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳସ୍ୱରୂପ, ନକଆଉଟ୍ ପ୍ରତିଷ୍ଠାତା ରେଖା ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଛି ଯାହା ତତ୍ତ୍ୱଗତ ଭାବରେ ମୂଷାରେ ଜିନ୍ ବିଲୋପନର ପରିଣାମ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ (Qin et al., 2016)। ଏହିପରି, CRISPR/Cas9 ପାରମ୍ପରିକ ଜେନେଟିକ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ ତୁଳନାରେ କମ୍ ଖର୍ଚ୍ଚରେ TNBC ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ମୂଷା ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ। CRISPR/Cas ସିଷ୍ଟମ ବ୍ୟବହାର କରି, ଏକ ନୂତନ ନକଆଉଟ୍ ମାଉସ୍ ମଡେଲ୍ ବିକଶିତ ହୋଇଛି ଯାହା TNBC ରେ ଗୋଟିଏ କିମ୍ବା ଅଧିକ ଅନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ଜିନ୍ ରେ ପଏଣ୍ଟ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ସଫଳତାର ସହିତ ପରିଚିତ କରାଇପାରେ। ଏହି ଧାରଣା ଉପରେ ଆଧାରିତ, BRCA1 ଏବଂ p53 ର CRISPR/Cas9-ମଧ୍ୟସ୍ଥତା ବିଲୋପନ ବ୍ୟବହାର କରି TNBC ର ପ୍ରାଣୀ ମଡେଲ୍ ମଧ୍ୟ ବିକଶିତ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହାର ପରିଣାମ ସ୍ୱରୂପ HR ମରାମତି, ଜିନୋମିକ୍ ଅସ୍ଥିରତା ଏବଂ ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଫେନୋଟାଇପ୍ସ ନଷ୍ଟ ହୋଇପାରେ (Annunziato et al., 2020)।
ବର୍ତ୍ତମାନ, TNBC ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ମାମୋଗ୍ରାଫି, ମ୍ୟାଗ୍ନେଟିକ୍ ରେଜୋନାନ୍ସ ଇମେଜିଂ (MRI) ଏବଂ ଅଲ୍ଟ୍ରାସାଉଣ୍ଡ ଭଳି ବିଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ତଥାପି, ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକର କିଛି ସୀମା ଅଛି। ମାମୋଗ୍ରାଫି ମେଟାଷ୍ଟେସ୍ ପରିବର୍ତ୍ତେ ସ୍ଥାନୀୟ ସ୍ତନ ଟିସୁ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ଯେଉଁଠାରେ କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଅନ୍ୟ ଅଙ୍ଗକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୋଇଥାନ୍ତି। TNBC ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ଅଲ୍ଟ୍ରାସୋନୋଗ୍ରାଫି ଏକ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ପଦ୍ଧତି ନୁହେଁ (ଚେନ୍ ଏବଂ ଲି-ଫେଲକର, 2023)। ଅଲ୍ଟ୍ରାସାଉଣ୍ଡ ଏବଂ ମାମୋଗ୍ରାଫି ତୁଳନାରେ MRI ର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଅଧିକ, କିନ୍ତୁ ଏହାର ନିର୍ଣ୍ଣୟ ସଠିକତା ସୀମିତ (ଶା ଏବଂ ଚେନ୍, 2022)। ଟିସୁ ବାୟୋପ୍ସି କର୍କଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାର ଏକ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ଉପାୟ। ତଥାପି, କିଛି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଯଦି ଛୁଞ୍ଚି ଆଗ୍ରହର କ୍ଷେତ୍ରରୁ ଦୂରେଇ ଯାଏ ତେବେ ଏକ ବାୟୋପ୍ସି କର୍କଟ ଟିସୁକୁ ହରାଇପାରେ। ଏହା ସହିତ, ଏହା ବହୁତ ମହଙ୍ଗା ଏବଂ ରୋଗୀ ପାଇଁ ଆଘାତଜନକ ହୋଇପାରେ। TNBC ଏକ ବିଷମ ପ୍ରକାରର କର୍କଟ, ତେଣୁ ଏକ ବାୟୋପ୍ସି କର୍କଟ ରୋଗର ପ୍ରକାର ବିଷୟରେ ଯଥେଷ୍ଟ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିନପାରେ। ତେଣୁ, TNBC ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଏକ ନୂତନ ନିର୍ଣ୍ଣୟାତ୍ମକ ଭାବରେ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ପଦ୍ଧତି ତୁରନ୍ତ ଆବଶ୍ୟକ। CRISPR/Cas9 ସ୍ତନ କର୍କଟ ରୋଗ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ବିକଳ୍ପ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରେ। ଏଥିପାଇଁ, TNBC ର ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ PCR ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। ପ୍ରଥମେ, CRISPR ସିଷ୍ଟମର Cas9 ଏବଂ cpf1 ପ୍ରୋଟିନଗୁଡ଼ିକୁ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ DNA ଅପସାରଣ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ଏବଂ ତା’ପରେ ଏହି ଦୁଇଟି ପ୍ରୋଟିନ (Cas9 ଏବଂ cpf1) ଲକ୍ଷ୍ୟ DNA ସହିତ ବାନ୍ଧିବା ପୂର୍ବରୁ PAM କ୍ରମକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବେ (ଦୀପକ ସିଂହ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2021)। । ଏହିପରି, PCR କର୍କଟ ବିକାଶ ସହିତ ଜଡିତ ମ୍ୟୁଟେସନକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ। ବିଭିନ୍ନ କର୍କଟ ରୋଗରେ ବିଭିନ୍ନ ମ୍ୟୁଟେସନ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଅନେକ ଅଧ୍ୟୟନ ଏହି CRISPR-ଆଧାରିତ ରଣନୀତି ଗ୍ରହଣ କରିଛି (Safari ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2019)। ଏହିପରି, CRISPR-ଆଧାରିତ PCR ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ବାୟୋପସି-ଆଧାରିତ ଇମ୍ୟୁନୋହିଷ୍ଟୋକେମିଷ୍ଟ୍ରି ଭଳି ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ପଦ୍ଧତି ଉପରେ TNBC ନିର୍ଣ୍ଣୟର ନିର୍ଭରତାକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ।
TNBC (ଚେନ୍ ଏବଂ ରୁସୋ, 2009) ରେ ହରମୋନ୍ ରିସେପ୍ଟର ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଜିନୋଟାଇପିକ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରାଯାଇଛି। ପଏଣ୍ଟ-ଅଫ୍-କେୟାର ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ସ ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋଆରେ ବ୍ୟବହାର କରି CRISPR/Cas9-ଆଧାରିତ PCR ରଣନୀତି ଏହି ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ନିରୀକ୍ଷଣ କରିପାରିବ (ହାଜିଆନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2019)। ଏହା TNBC ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ବିଷୟରେ ପ୍ରାସଙ୍ଗିକ ସୂଚନା ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟସେବା ପ୍ରଦାନକାରୀଙ୍କୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ, ଯାହା ସେମାନଙ୍କ ଚିକିତ୍ସା ପାଠ୍ୟକ୍ରମକୁ ଉନ୍ନତ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରିବ। ତଥାପି, ଏହି ମିଳିତ କୌଶଳର ସୀମାବଦ୍ଧତା ଅଛି। ତେଣୁ, TNBC ର ନିର୍ଣ୍ଣୟ ପାଇଁ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟସେବାରେ ଏହି CRISPR/Cas-PCR ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ବ୍ୟାପକ ଗବେଷଣା ପ୍ରୟାସ ଆବଶ୍ୟକ (ୟାଙ୍ଗ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ, 2019)।
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଅକ୍ଟୋବର-୧୪-୨୦୨୪